197759. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a növekedési hormont felszabadító faktor analógjai előállítására
197759 A jelen találmány tárgya eljárás olyan új peptidek előállítására, amelyek befolyásolják az emberek és más állatok agyalapi mirigyének működését. Részletesebben, a találmány tárgya eljárás olyan peptidek előállítására, amelyek elősegítik a növekedési hormonnak az agyalapi mirigyből való felszabadulását. Az élettannal foglalkozó szakemberek már régen felismerték, hogy az adenohipofízis (az agyalapi mirigy egyik része) működését a hipotalamusz szabályozza az általa termelt különleges hormonok révén, ezek az anyagok serkentik vagy gátolják az agyalapi mirigy összes hormonjának kiválasztását. 1972-ben leírták a hipotalamusz által termelt egyik gátló anyagot, a szomatosztatint, amely gátolja a növekedési hormon kiválasztását. 1982-ben humán (emberi) hasnyálmirigy-daganatok kivonataiból elkülönítettek egy növekedési hormon releasing faktort (serkentő anyagot) [human pancreatic (tumor) growth hormon releasing factor, rövidítése: hpGRF[, megtisztították, szerkezetét felderítették, szintetikus úton előállították és megvizsgálták. A vizsgálat során megfigyelték, hogy ez az anyag elősegíti a növekedési hormon felszabadulását az agyalapi mirigyben. E két, az agyalapi mirigyre ható faktort totálszintézissel is előállították, és elkészítették e természetes anyagok egyes analógjait is. Az az elfogadott nézet, hogy a humán hipotalamusz által termelt növekedési hormon releasing faktornak pontosan ugyanaz a szerkezete, mint a fentiekben másodikként említett vegyületnek. így e vegyületet a továbbiakban humán növekedési hormon releasing faktornak nevezzük. A patkány hipotalamusz által termelt, megfelelő növekedési hormon releasing faktor, valamint a sertés hipotalamusz által termelt, megfelelő növekedési hormon releasing faktor, továbbá a szarvasmarha hipotalamusz által termelt, megfelelő növekedési hormon releasing faktor szerkezetét ugyancsak felderítették, és a vegyületeket szintetikus úton is előállították. A jelen munka során szintetikus peptideket állítottunk elő és vizsgáltunk, e polipeptidek az agyalapi mirigy sejtjeinek tenyészetéből növekedési hormont szabadítanak fel, és legalább részben ellenállnak a szervezetben végbemenő enzimes bomlásnak, továbbá hatásuk lényegesen erősebb. A jelen találmány szerinti vegyületek olyan peptidanalógok, amelyekben a pepíidlánc 27—32 aminosavból épül fel. Az ilyen peptideket tartalmazó gyógyászati készítményeket az ember- és állatgyógyászati klinikai gyakorlatban gyógyászati, valamint diagnosztikai célokra használhatjuk. Ezenkívül a készítmények alkalmazhatók arra is, hogy elősegítsük melegvérű állatok,'beleértve a szárnyasokat is, növekedését, továbbá a mezőgazdaságban hidegvérű állatok, példá1 2 ul halak, angolna és más, hasonlók növekedését. A peptidek leírására a Schröder és Lübke által meghatározott [The Peptides (A pep^ tidek), Academic Press, 1965] nevezéktant használjuk, ahol az N-terminális aminocsoportja a szokásos módon a képlet bal oldalára kerül, és a C-terminális karboxilcsoportja a képlet jobb oldalán helyezkedik el. Természetes aminosavakon a szokásos, a természetben előforduló aminosavakat értjük, ezek a glicin, alanin, valin, leucin, izoleucin, szerin, treonin, lizin, arginin, aszparginsav, aszparagih, glutaminsav, glutamin, cisztéin, metionin, fenil-alanin, tirozin, prolin, triptofán és a hisztidin. Ha egy aminosav izomerek formájában létezhet, akkor a megadott rövidítések az L-izomereket jelölik, illetve az ettől való eltéréséket külön megadjuk. Az Na-metil-D-alanin- az alanin D-izomerjének az a-aminocsoporton metilcsoporttal helyettesített származéka. A találmány tárgya eljárás az R,-R2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-R8-Ser-R10-Arg-R12-R13-Rl4- -Gly-Gln-Leu-Rl8-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R24- -R25-Ile-Nle-W (I) általános képletű ahol R, jelentése Tyr, D-Tyr, Ac-Tyr, His, vagy N“-metil-D-Tyr, R2 jelentése Alá vagy N“-metil-D-AIa; R10 jelentése Tyr vagy D-Tyr; Ri4 jelentése Leu vagy D-Leu; Rl8 jelentése Tyr vagy Ser; R2g jelentése Asn vagy Ser; R29 jelentése Arg vagy D-Arg; W jelentése -NHR, -R28-NHR, R28-R29-NHR vagy R28-R29-Gln-Gln-Gly-NHR és R jelentése hidrogénatom vagy etilcsoport, és Rg jelentése Asn, R12 jelentése Lys, R,3 jelentése Val, R24 jelentése Gin, R25 jelentése Asp, vagy R8 jelentése Ser, R,2 jelentése Arg, R13 jelentése lie, R24 jelentése His, R25 jelentése Glu, és W jelentése -Asn-R29-NHR, azzal a megkötéssel, hogy R2 jelentése N°-metil-D-Ala vagy R14 jelentése D-Leu és/vagy R29 jelentése D-Arg szintetikus peptidek előállítására. A találmány szerinti kiindulási peptideket valamely alkalmas módszerrel állítjuk elő, például kizárólág szilárd fázisú módszerrel, részben szilárd fázisú módszerrel, fragmens-kondenzáció útján vagy a- klasszikus, oldatban leíolyatott szintézissel. A közelmúltban kidolgozott rekombinációs dezoxi-ribonukleinsavas módszer is alkalmazható a növekedési hormon analógja egy olyan részletének előállítására, amely csak természetes aminosavakat tartalmaz, majd ezt a részletet hozzákapcsolhatjuk valamely, az N-terminálisan lévő rövid peptidlánchoz. így például a kizárólag szilárd fázisú szintézis módszerét a „Solid-Phase Peptide Synthesis“ (Szilárd fázisú peptid-szintézis, Stewart and Young, Freeman and Co., San Francisco, 1969) című tankönyv írja le, további példákat ismertet Vale és munkatársai 1978. augusztus 8-án 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
