197752. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált 3-fenil-7H-tiazolo [3,2-b] [1,2,4]triazin-7-onok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
197752 a mindenkori vizsgálati anyag vagy a tiszta kötőanyag (pozitív kontroll) orális beadása. A bal lábba nátrium-klorid-oldatot fecskendeztünk. Egy nem-érzékenyített állatcsoportot (negatív kontroll) ugyancsak ovalbuminnal kezeltünk, hogy a proteinnel szembeni nem-specifikus reakciók kizárhatók legyenek. A készítmény-hatás mérésének paraméteréül a lábtérfogat-növekedés gátlása szolgált, szemben az érzékenyített, de kezeletlen kontrollcsoporttal (pozitív kontroll), 4 órával az ovalbumin-provokáció után, amikor a duzzadás maximális értéket ér el. Ezek között a kísérleti feltételek között a nem-szteroid gyulladásgátlók — beleértve a Naproxant is — hatástalanok. Ezzel szemben pl. az 1. példa szerinti vegyület orális beadása után az Arthus-reakció 10 és 15 mg/kg ED50 értékkel figyelemreméltóan gátolható. 5. Antioxidativ hatás A jelenleg érvényes elmélet szerint a reumás arthritis és egyéb gyulladásos megbetegedések sok tényezőtől függő progresszív lefolyásában jelentős szerepük van azoknak az agresszív oxigéngyököknek, amelyek a krónikus gyulladási folyamatok során exceszszív képződnek, és mint nagyon toxikus gyulladásközvetítők a sejtmembránok irreverzibilis lipidperoxidációja miatt végbemenő kötőszövetbomlást folytonosan fenntartják. Kö- 3 3. táblázat 21 vétkezésképpen feltehető, hogy olyan antioxidativ hatású gyógyszer, mely ezt az extrém cítotoxikus oxigéngyököt képes dezaktivalni, a krónikus gyulladási eseménybe cél- 5 zottan be tud avatkozni. Az ilyen, oxigéngyökkel létrehozott szövetbomlást bemutató alkalmas állatmodell az adriamicinnel (Doxorubicin) előidézett gyulladás a patkányokon. a) Adriamicinnel kiváltott gyulladás *0 A vizsgálatokat 200—230 testsúlyú hím Sprague-Dawley patkányokon hajtottuk végre D. M. Siegel és tsa [Inflammation, 4 (1980) 233. old.) módszere szerint, 7 tagból álló csoportokon; az állatok bal hátsó lábán a bőr alá 15 0,1 ml 0,9 t%-os konyhasóoldatban oldott 0,1 mg adriamicint fecskendeztünk. 72 óra elteltével a gyulladási fok mértékeként a lábtérfogat növekedését plethysmographikus méréssel meghatároztuk. 20 A vizsgált készítményt 1%-os vizes karboxi metil-cellulóz-szuszpenzióban orálisan adtuk be naponta egyszer, 4 egymásután következő napon, az adriamicininjekció napjától kezdve. 25 Amint a 3. táblázatból kiderült, ebben a tesztben is például az 1. példa szerinti vegyület erős, a dózistól függő védőhatást mutat az adriamicinnel kiváltott szövetbomlással szemben. Ebben a kísérletben hatástalanok 30 a siteroid és nem-szteroid — beleértve a Naproxant — gyulladásgátlók. 22 Adriamicinnel előidézett gyulladás gátlása Állatcsoport Dózis p.o. ng/kg Láb :érfogat növekedés ^ul-ben Védőhatás % Kontroll-430-1. példa szerinti 20 220 49x 40 200 54x vegyület 30 10 98x X szignifikáns p <C 0,05 b) A lipid-peroxidáció in-vitro-gátlása A találmány szerinti vegyületeknek az agresszív oxigéngyökkel szembeni kifejezett védőhatása meggyőző bizonyítékát nyújtja a tiobarbitursav-teszt (A. Ottolenghi, Arch Biochem. Biophys. 79 1959, 355— 363. old.). Ezzel az in-vitro módszerrel, a hártyához kötött, többszörösen telített zsírsavak oxidativ leépítésénél keletkező malon-dialdehid alapján meghatározható mind a mikroszomális, mind a mitocondriális lipid peroxidáció antioxidativ módon ható készítményekkel történő befolyásolása. Az (I) általános képletű vegyületek itt is erős gátló hatást fejtenek ki. Az 1. példa 12 szerinti vegyületek esetében a patkánymájbó: származó mikroszomákkal és mitochondriumokkal például 6.10-7, illetve 3.10“6 mól/1 IC->0-értékek adódtak. 55 6. 5-lipoxigenáz gátlása A találmány szerinti vegyületeknek az 5- -lipoxigenázzal katalizált arachidonsav leépülésre kifejtett gátló hatását szokásos mó- 60 dói, izolált polimorph-magos humán granulocitákon véghezvitt in-vitro-kísérletekkel igazo tűk. Ehhez a Calcium-Ionophor A 23 187 által (Calbiochem GmbH, Frankfurt/Main, Biochemical Catalog 1985, 284. old.; stimu- 65 Iáit sejteket 14C-jelzett arachidonsavval in-
