197715. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzokinon származékok és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1. kísérlet A találmány szerinti eljárással előállított (I—3) általános képletű vegyületek előnyös farmakokinetikai tulajdonságait az 58057 számú európai szabadalmi leírásból ismert vegyületekhez viszonyítva az alábbiakban ismertetjük. a) Farmakológiai aktivitás vizsgálata in vitro A marhaszív mitochondrium-részecskéket szokásos módon izoláljuk [P.V. Blair, Methods Enzymol. 10, 78 (1978)], és 0,25 mól/1 koncentrációjú szacharózoldatban szuszpendálva vagy liofilizálva —20°C-on tároljuk, és közvetlenül a felhasználás előtt felolvasztjuk, illetve 0,25 mól/l koncentrációjú szacharózoldatban szuszpendáljuk. A fenti módon kapott készítményt H. Morimoto és I. Imada módszere szerint [Biochim. Biophys. Acta 275, 10 (1972)] acetonnal kezeljük. A szukcinát-oxidáz aktivitást szintén az utóbbi irodalmi helyen leírtak szerint határozzuk meg. Az oxigén-fogyasztást Clark-féle oxigénelektróddal mérjük (Gilson oxygraph, Type K-1C). A vizsgálandó vegyületeket tömegükhöz viszonyítva 5—10-szeres mennyiségű detergenst tartalmazó vizes oldat formájában adjuk a mitochondrium-készítmény szuszpenziójához. A reakcióelegy összetétele az alábbi: 200 mmól/l szacharóz, 10 mmól/1 Tris-HCl (pH 7,4), 20 mmól/1 KC1, 3 mmól/1 MgCl2.6H20, 50 pmól/l etilén-diamin-tetraecetsav-dinátriumsó (EDTA-2Na), 100 pg citokróm C, 2,5 mmól/1 kálium-szukcinát, 1,0 mg proteinnek megfelelő mitochondriális preparátum, és 10 nmól/mg protein koncentrációban a vizsgált vegyület, polioxietilén-oktil-fenil-éter detergenst (OP-10) tartalmazó oldat formájában, vagy kontrollként 50 pg OP-10-et tartalmazó oldat. A végtérfogat 2 ml, a vizsgálatot 25°C-on végezzük. A vizsgálati eredményeket az 1. táblázatban ismertetjük. 1. táblázat: Acetonnal kezelt marhaszív-mitochondriumok szukcinát-oxidáz-aktivításának helyreállítása 13 Vegyület Relatív aktivitás ubikiképlete non-2 (Q-2) aktivitásához viszonyítva“5 (%± ±S.E.) (A) 82,2 ±6,3 (találmány szerinti) (B) 82,0±8,2 (ismert) a) az aktivitások összehasonlítására a Q-2-t [(D) képletű vegyület] standardként minden 3—5. vizsgálatban megvizsgáltuk, és az aktivitásokat a Q-2 aktivitásának %ában fejeztük ki (± standard hiba) Q-2 aktivitása: 104,3±4,7 ng atom oxigén/perc/mg protein Az 1. táblázat adataiból látható, hogy a találmány szerinti (A) képletű vegyület [6- - (10-hidroxi-10-metiI-undecil) -2,3-dimetoxi-5- -metiI-l,4-benzokinon] és az ismert (B) képletű vegyület [6-(10-hidroxi-decil) -2,3-djrpetoxí-5-metil-l,4-benzokinon] farmakológiai aktivitása közelítőleg azonos. B) Farmakokinetikai tulajdonság vizsgálata in vitro 6 hetes hím patkányoknak orálisan 100 mg/kg dózisban adjuk a vizsgálandó vegyületeket. Az állatokat 30 perc múlva leöljük, és a májat eltávolítjuk. A májat éterrel extraháljuk, és az éteres fázist 1%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk. A vizsgált vegyületek mennyiségét az éteres fázisban nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással határozzuk meg. Az eredményeket a 2. táblázatban ismertetjük. 2. táblázat: (A), illetve (B) képletű vegyület koncentrációja a májban, 100 mg/kg orális dózis beadása után 14 Vegyület Változatlan vegyület mennyisége képlete (pg/g máj) szabad formában“5 iA) 2,03 3,69 "(B) nem-kirnütatha~tós> nem kimutatható * 2 a) az adatokat két független kísérletben határoztuk meg b) kevesebb, mint 0,1 pg/g máj metabolitját [2,3-dimetoxi-5-metiI-6- (3- -karboxi-propil)-l,4-benzokinont] kimutattuk a májban, 10,1, illetve 20,1 pg/g koncentrációban 2. kísérlet A találmány szerinti eljárással előállított (I—3) általános képletű vegyületek előnyös farmakológiai aktivitását az A-1493980 számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírásból ismert (1) képletű vegyülethez viszonyítva az alábbiakban bizonyítjuk. Vizsgált vegyületek: (a) vegyület: 6-(3-hidroxi-propil)-2,3-dimetoxi-5-metil-l,4-benzokinon [(C) általános képlet, k=3] (b) vegyület: 6-(4-hidroxi-butil)-2,3-dimetoxi-5-metil-l,4-benzokinon [(C) általános képlet, k=4] (c) vegyület: 6-(6-hidroxi-hexil)-2,3-dimetoxi-5-metil-l,4-benzokinon ((C) általános képlet, k=6) (d) vegyület: 6- (10-hidroxi-decil) -2,3-dimet-oxi-5-metil-l,4-benzokinon [(C) általános képlet, k=10] (e) vegyület: 6-(11 -hidroxi-undeci!) -2,3-dimetoxi-5-metil-1,4-benzokinon [(C) általános képlet, k=ll] 9 197715 5 10 15 20 25 30 35 ' 40 45 50 55 60 65
