197596. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás antraciklin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

197596

A találmány új, antraciklin típusú vegyü- Ietek mikrobiológiai úton történő előállítására vonatkozik. Az új vegyületek az (la), illetve (Ib) képletnek felelnek meg. Az antibiotikumokat kezarirodinoknak nevezzük. A kezarirodinokat úgy állítjuk elő, hogy a HPL Y-11472 jelű, DSM 2658 szám alatt deponált mikroorganizmust fermentáljuk és a fermentálás során kémiai inhibitorként nátrium-azidot, vas(III)-kloridot vagy aszkorbinsavat adunk a tenyészethez.

Az új vegyületeknek baktériumölő hatása van Gram-pozitív kórokozók ellen; hatnak továbbá jó néhány tumorfajta ellen is. Mint a képletekén látható, szerkezetük a cukorkombináeióban Különbözik meg. Az (la) képletű vegyület a rődozamin-dezoxifukóz-rodinóz cukorkombinációt (röv.: Roa-dF-Rod, lásd képletrajz), az (1b) képletű vegyület a rodozamin-rodinóz-rodinóz cukorkombinációt (röv.: Roa-Rod-Ród) tartalmazza. Az alábbiakban a vegyületeket A-kezarirodinnak, illetve B-kezarirodinnak nevezzük.

A kezarirodin előállításához alkalmazott mikroorganizmus: Streptomyces purpurascens (házi jel: HPL Y-l 1472, letétbehelyezési szám: DSM 2658, azaz a _Deutsche Sammlung von Mjkroorganismen gyűjteményben van deponálva). A mikroorganizmus az Actinomycetales rendbe, a Streptomycetaceae családba és a Streptomyces nemzetséghez tartozik. A mikroorganizmust az alábbiakban DSM 2658 S. purpurascensként vagy termelő törzsként említjük.

Bebizonyosodott, hogy különböző Streptomyces törzsek antraciklin-típusú antibiotikumokat termelnek; ezeket az irodalom leírta. Az antraciklin-típusú antibiotikumokat a gyógyászatban rákos daganatok visszaszorítására, valamint antibakteriális hatóanyagként alkalmazzák. Az ismertté vált antraciklin típusú antibiotikumok közül klinikailag eddig a daunomicint és az adriamicint alkalmazzák.

Rodomicin, izorodomicin, valamint a rodomicinnel rokon antibiotikumok az irodalomból ismertek (J. Med. Chem. 20, 957—960 ( 1977) ). Az aklacinomicint a 3 988 315 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, valamint Oki és társai cikke (J. Antibiotics 28, 830 (1975); 32, 791—812 (1979)) részletesen ismerteti.

Az A- és B-cinerubin a 846 130 sz. brit és a 3 864 480 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból, valamint a szakirodalomból (Keller-Schierlein és társai: Antimicrobial Agents and Chemoterapy 1970, 68. old.;

C.A. 54, I466i (I960), J. Antibiotics 28, 830 (1974)) ismert.

Egyéb antraciklin típusú antibiotikumokat az „Index of Antibiotics from Actinomycètes" (főkiadó: Hamao Umezawa, University Park Press, State College, Pennsylvania, USA (1967)) az alábbi oldalokon tárgyal:

Antibiotikum Oldalszám

A- és B-aklacinomicin 101 —102

adriamicin 122

1

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Antibiotik'um Oldalszám

karminomicin I 225

galirubinok 405—408

rodomicin X és Y 879—880

ß-rodomicin 881—885

y-rodomicin 886—892

steffimicin 945.

A találmány szerinti eljárással az (I) általános képletű, antracjklin-típusú kezarirodin antibiotikumokat úgy állítjuk elő, hogy a DSM 2658 sz. S. purpurascens termelő törzset 6,5 és 8,5 közötti pH érték mellett 24—40°C-on aerob körülmények között fermentáljuk szénforrást és nitrogénforrást, valamint szervetlen tápsókat és nyomelemeket tartalmazó tápközeg felhasználásával. A fermentálást habzásgátló (pl. szilikonolaj vagy Desmorphen* gyártja: Beyer, Leverkusen, NSZK jelen- vagy távollétében, de kémiai inhibitor jelenlétében végezzük, és a hatóanyagokat ismert módon különítjük el a micéliumból és a tenyészléből.

A szénforrás lehet glükóz, szacharóz, keményítő, glicerin, dextrin, fruktóz, melasz, zabliszt, maltóz, laktóz, galaktóz. Előnyös a glükóz, keményítő és szacharóz alkalmazása. Nitrogénforrásként szójaliszt, élesztőliszt, élesztőkivonat, húskivonat, malátakivonat, agar, pepton, kazein, gyapotmagolaj, csicseriborsó magjából nyert liszt, valamint szervetlen vegyületek, így pl. ammónium-szulfát, nátrium-nitrát, ammónium-klorid vagy kálium-nitrát jönnek számításba. Kívánt esetben tápanyagként szervetlen sókat adagolhatunk, például az alábbiakat: magnézium-szulfát, nátrium-klorid, kálium-klorid, kálium-hidrogén- és -dihidrogén-foszfát, kalcium-klorid, kalcium-karbonát, ammónium-hidrogén-foszfát, nátrium-hidrogén- és -dihidrogén-foszfát, magnézium-foszfát vagy kalcium-foszfát. Nyomelemként vas-, mangán-, réz-, cink- és egyéb nehézfémsók alkalmazhatók. Inhibitorként az alábbiak kerülnek felhasználásra:

A DSM 2658 sz. S. purpurescens termelő törzset 24°C és 40°C közötti hőmérsékleten,

6,5 és 8,5 közötti pH érték mellett fermentáljuk. Előnyösen 27°C-on, aerob körülmények között, 7,0 pH érték mellett végezzük. A kémiai inhibitort, így vas (III)-kloridot, nátrium-azidot vagy aszkorbinsavat a fermentálás 20— 36. órájában adagolhatjuk, 10—80 mg/I végkoncentráció elérése érdekében. Előnyösen a 27. óra után nátrium-azidot adagolunk, hogy a végkoncentráció 20 mg/1 legyen. 48—56 óra fermentálás után, miután a kívánt vegyületek optimálisan feldúsultak, a tenyésztést megszakítjuk. A fermentálást előnyösen süllyesztett fermentálásként valósítjuk meg. Az elején 0,025% mennyiségig a Desmophen Bayer, Leverkusen habzásgátlót adagolhatjuk.

A kapott tenyészlében a feldúsult kezarirodin részben a micéliumban, részben a felülúszóban van.

A fermentáció előrehaladását és az antraciklin típusú vegyületek képződését a tenyész-2