197450. lajstromszámú szabadalom • Reagens és eljárás fagocita aktivitású sejtek kimutatására
4 197450 5 gens készlet felhasználásával a diagnosztikai munka az eddig ismerteknél gyorsabban és egyszerűbben végezhető el, és a kimutatási módszer megbízhatósága és reprodukálhatósága felülmúlja a korábbi megoldásokét. A találmányt az oltalmi kór korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa Reagens készletet készítünk a következő oldatokból: I. Reagens oldat: 0,1 g poli(vinil-alkoholt) 45 ml forró desztillált vízben oldunk, majd az oldathoz szobahőmérsékletre hűtés után 0,8 g nátrium-kloridot, 0,1 g glükózt, 0,02 g benzoésavat és 0,1 g lizozim enzimet adagolunk. Az Így kapott oldat pH-ját 1 mólos Trisz [trisz(hidroxi-metil-amino-metán)] pufferrel 6,9-re állítjuk, és térfogatát desztillált vízzel 50 ml-re egészítjük ki. Az így kapott oldathoz hozzáadjuk 0,2 g neutrálvörös [3-amino-7- -(dimetil-amino)-2-metil-fenozin-hidroklorid] 50 ml desztillált vízzel készített oldatát, majd alapos keverés után az oldatot G-5-ös üvegszűrőn csíraszegényre szűrjük, és a szűrletet 1-1 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük. II. Mosó-hígító oldat: 350 ml desztillált vízben 4 g nátrium-kloridot, 0,2 g kálium-kloridot, 0,1 g magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,09 g kalcium-klorid-dihidrátot, 0,03 g dinátrium-hidrogén-foszfát-dihidrátot, 0,03 g kálium-dihidrogén-foszfátot és 0,5 g glükózt oldunk, majd az oldathoz 0,1 g benzoésavat adunk. Ezután az oldathoz 0,175 g nátrium-hidrogén-karbonát 12,5 ml desztillált vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet alaposan összekeverjük, majd az így kapott oldat (Hank-oldat) pH-ját 5 ml 1 mólos vizes N-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etán-szulfonsav oldattal 7,3-ra állítjuk be. Ezután az oldat térfogatát desztillált vízzel 500 ml-re egészítjük ki, majd G-5-ôs üvegszűrőn csiraszegényre szűrjük, és 5- -5 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük. 2. példa Reagens készletet készítünk a következő oldatokból: I. Reagens oldat: A reangens oldat összetétele és előállítása megegyezik az 1. példában leírtakkal. 4 II. Mosó-hígító oldat: 350 ml desztillált vízben 4 g nátrium-kloridot, 0,2 g kálium-kloridot, 0,1 g magnézium- Bzulfát-heptahidrátot, 0,03 g dinétrium-hidrogén-foBzfátot, 0,03 g kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,5 g glükózt, és 0,09 g kalcium-klorid-dihidrátot oldunk, és az oldathoz 0,5 g benzoésavat adunk. Ezután az oldathoz 2,4 g nátriura-hidrogén-karbonát 30 ml desztillált vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet alaposan összekeverjük, majd az így kapott oldat (Hank-oldat) pH-ját 5 ml 1 mólos vizes N-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etán-szulfonsav oldattal 7,3-ra állítjuk be. A kapott oldat térfogatát desztillált vízzel 500 ml-re egészítjük ki, majd G-5-ôs üvegszűrőn csiraszegényre szűrjük, és 5- -5 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük. 3. példa Reagens készletet készítünk a kővetkező oldatokból: I. Reagens oldat: A reagens oldat összetétele és előállítása megegyezik az 1. példában leírtakkal. II. Mosó-hígító oldat: 350 ml desztillált vízben 4 g nátrium-kloridot, 0,2 g kálium-kloridot, 0,1 g magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,03 g dinátrium-hidrogén-foszfát-dihidrátot, 0,03 g kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,5 g glükózt és 0,09 g kalcium-klorid-dihidrátot oldunk, majd az oldathoz 0,6 g nátrium-benzoátot adunk. Ezután az oldatot 0,130 g nátrium-hidrogén-karbonát 10 ml desztillált vízzel készített oldatával alaposan összekeverjük, és az így kapott oldat (Hank-oldat) pH-ját 5 ml 1 mólos vizes N-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etán-szulfonsav oldattal 7,3-ra állítjuk be. A kapott oldat térfogatát desztillált vízzel 500 ml-re egészítjük ki, majd G-5-ös üvegszűrőn csiraszegényre szűrjük, és 5- -5 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük. 4. példa Reagens készletet készítünk a kővetkező oldatokból: I. Reagens oldat: A reagens oldatot az 1. példában leirt módon állítjuk ejő, azzal a különbséggel, hogy 0,8 g neutrálvöröst használunk. Az így kapott reagens oldatot szűrés után 1-1 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
