197450. lajstromszámú szabadalom • Reagens és eljárás fagocita aktivitású sejtek kimutatására
6 197450 7 II. Mosó-higító oldat: A mosó-hígító oldat összetétele és előállítása megegyezik az 1. példában leírtakkal. Az 1-4. példa szerinti reagens készletekből egy-egy vizsgálat elvégzéséhez egy ampulla reagens oldat és egy ampulla mosó-higitó oldat szükséges. 5. példa 5 ml magzatvizhez 1 ampulla (1 ml), az 1. példa szerinti összetételű reagens oldatot 15 adtunk. Az elegyet 15 perces inkubálás után centrifugáltuk, a felülúszót leöntöttük, majd az üledékhez 0,5-2,0 ml mosó-hígító oldatot adtunk. A festett mintát Bürker kamrában vizsgáltuk és értékeltük. 20 összehasonlítás céljából 5 ml magzatvizet 1 ml, az Orvosi Hetilap 125, 9 (1984), ill. N. Eng. J. Med. 310, 1463 (1984) szakcikkben közöltek szerint kezeltünk a szakcikkekben közölt módon HAM F-10 típusú tápoldattal 25 (gyártja a Gibco cég, Nagy-Britannia) frissen készített neutrálvörös oldattal. Az összehasonlító kísérletekben a sejtek festékfelvételét és a szín tartósságát vizsgáltuk és értékeltük. Az észlelt adatok sze- 30 rint a találmány szerinti összetételű reagens oldat alkalmazásakor a sejtek festékfelvétele 25-30%-kal nőtt az ismert összetételű oldattal elérthez viszonyítva, és a szín tartóssága közel tízszerese volt az ismert összetételű 35 oldat használatakor kapott értéknek. Az ismert összetételű reagens oldatot szobahőmérsékleten 1 hétig tároltuk, majd megkíséreltük sejtfestésre felhasználni. Az oldat sejtfestésre alkalmatlanná vált. Ezzel 40 szemben a találmány szerinti összetételű reagens oldat egy éves tárolás után is változatlan eredménnyel alkalmazható volt setjfestésre. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Neutrálvöröst tartalmazó reagens oldat fagocita aktivitású sejtek kimutatására, ®0 azzal jellemezve, hogy 0,2-0,8 tömeg* neutrálvörőst, 0,1-0,25 tömeg* lizozim enzimet, 0,8-2,0 tömeg* nátrium-kloridot, 0,1-0,3 tömeg* szacharidot és adott esetben 0,02-0,6 tömeg* tartósítószert tartalmaz 3,0 és 8,0 közötti célszerűen 3,5 és 5,0 közötti pH-értékű vizes oldat formájában. 2. Az 1. igénypont szerinti reagens oldat, azzal jellemezve, hogy szacharidként a sejtek számára energiaforrásként hasznosítható mono- vagy diszacharidot, célszerűen glükózt tartalmaz. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti reagens oldat, azzal jellemezve, hogy tartósítószerként benzoésavat és/vagy poli(vinil-alkoholt) tartalmaz. 4. Eljárás fagocita aktivitású sejtek kimutatására neutrálvörössel végzett szinfestés útján, azzal jellemezve, hogy 0,2-0,8 tömeg* neutrálvöröst, 0,1-0,25 tömeg* lizozim enzimet, 0,8-2,0 tömeg* nátrium-kloridot, 0,1-0,3 tömegX szacharidot és adott esetben 0,02-0,6 tömeg* tartósítószert vízben oldunk, az oldat pH-ját 3,0 és 8,0 közötti, célszerűen 3,5 és 5,0 közötti értékre állítjuk, az oldatot sterilre szűrjük, majd az igy kapott reagens oldat 1 térfogategységnyi mennyiségét 3-8 térfogategységnyi vizsgálandó mintával, célszerűen magzatvízzel keverjük össze, és a kapott sejtszuszpenziót önmagában ismert módon hemocitométerben megvizsgáljuk. 5. Reagens készlet fagocita aktivitású sejtek kimutatására, azzal jellemezve, hogy dózisegységekbe kiszerelt, az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti reagens oldatból és dózisegységekbe kiszerelt mosó-hígító oldatból áll, és a reagens oldat és a mosó-higító oldat dózisegységeinek térfogataránya 1:(0,5- -2). 6. Az 5. igénypont szerinti reagens készlet, azzal jellemezve, hogy 1 ml-es dózisegységként ampullákba töltött reagens oldatból és 5 ml-es dózisegységenként ampullákba töltött mosó-hígító oldatból áll. 7. Az 5. vagy 6. igénypont bármelyike szerinti reagens készlet, azzal jellemezve, hogy mosó-higitó oldatként N-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etánszulfonsavval 7,2 és 7,4 közé beállított pH-értékű Hank-oldatot tartalmaz. Rajz nélk'il A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó, igazgatója 90.2053.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató 5
