197359. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bacitracin előállítására módosított Bacillus törzsek fermentálása útján
8 197359 9 3. példa Nagyüzemű fermentálás a hőmérséklet változtatásával 1. Oltóanyag előállítása 100 ml 16 órás YT tenyészettel 4 m3 K-3/72 tápoldatot oldtottunk, amelynek összetétele az alábbi: extrahált szójaliszt 4.5 v% kukoricaliszt 2.25 v% (NH«)2S04 0.2 v% CaC03 0.1 v% antihabzin A/3 0.2 tfX csapvizben felvéve. Az oltóanyagot 30 °C-on 12 órán át liter 0,25 1 levegőztetés mellett liter x perc szaporítottuk. Az inokulum fermentort 125 °C-on 45 percen át sterileztük, utána a pH 6,8-7,2 volt. 2. Termelő tenyészet 1 m3 inokulummal 19 m3 K-6 tápoldatot oltottunk, amelynek összetétele az alábbi: extrahált szójaliszt 6.74 v% kukoricaliszt 3.47 v% (NH4>2S04 0.13 v% CaC03 0.39 v% MgS04.7H20 0.021 v% MnS04.4H20 0.0016 v% antihabzin A/3 0.2 v% csapvizben A fermentort 125 °C-on 60 percen át sterileztük, utána a pH 6,8-7,2 volt. A fermentálást az első 8 órán át 30 °C-on, a 8. órától kezdve végig 37 °C-on végzeztük. Az liter első lépcsőben a levegőztetés 0,25 -liter x perc liter a második lépcsőben 0,5 ■■ volt. liter x perc A fermentációs idő 30-35 óra, a fermentáció végén a pH 8,0-8,3-ig emelkedett. Bacitracinaktivitás: PP-188 530 E/ml HS-13 570 E/ml. 4. példa Szójaliszt kiváltása A 3. példa szerint jártunk el azzal az eltéréssel, hogy az extrahált szójaliszt helyett 10 v% csillagfürtlisztet (vagy 10,53 vX borsólisztet) és 2,1 vX kukoricalisztet alkalmaztunk. A bacitracin szintézis eredménye változatlan maradt. 5. példa A hőmérséklet-profil optimálása A 3. példa szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy az első 9 órán át 39 °C-on folytattuk a fermentálást, utána óránként 1- -1 °C-kal csökkentettük a hőmérsékletet a 12. óráig. A 12. órától végig a hőmérséklet 36 °C volt. A levegőztetést az egész fermenliter tálás alatt 0,5 — értéken tartótliter x perc tűk. A fermentációs idő 25-28 órára csökkent, a bacitracin titer változatlan maradt. 6. példa Optimális lápközeg 100 ml 16 órás YT tenyészettel 4 m3 AGI jelű inokulum tápközeget oltottunk, amelynek összetétele az alábbi: extrahált szójaliszt 4.0 v% kukoricaliszt 1.0 vX CaC03 0.3 vX MgS04.2H20 0.02 vX antihabzin A/3 0.2 tfX A tápközeget 125 °C-on 45 percen át sterilezzük. Oltás után a pH 6,8-7,2 volt. A liter tenyészetet 37 °C-on 0,25 —■■■ ■ liter x perc levegőztetéssel, kevertetve 24 órán át spórázásig szaporiLott.uk. Ebből 1 m3-el 19 m3 AG tápközeget oltottunk, amelynek összetétele az alábbi: extrahált szójaliszt 6.74 vX kukoricaliszt 5.79 vX (NH4)2S04 0.05 vX CaCOa 0.53 v% MgS04.7Hz0 0.021 vX MnS04.41l20 0.0016 vX antihabzin A/3 0.2 tfX A fermentort 125 °C-on 60 percen át sterileztük, utána a pH értéke 6,8-7,2 volt. A levegőztetés és a hőmérsékletvezérlés az 5. példa szerint történt. A fermentációs idő 28-30 óra volt, a fermentáció végén a tenyészlé pH-értéke 7,4-7,8 volt. Bacitracintiter PP-188 630 E/ml HS-13 817 E/ml. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1.Eljárás bacitracin előállítására módosított bacillustörzsek hómérsékletvezérell, aerob fermentálása után, süllyesztett tenyészetben, alkalmas szénforrás, szerves és szervetlen nitrogénforrást, nyomelemeket és pufferként kalcium-karbonátot tartalmazó 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6 65
