197350. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán relaxint kódoló gén molekuláris klónozására és jellemzésére, valamint humán H1 relaxin előállítására
20 197350 21 eredményezi, amelyeknél a C végződésnél inkább amid, mint karboxi-forma található. Hacsak másképpen nem jelezzük, a lánc-kombinációs reakciót ugyanúgy végezzük, amint azt korábban leírtuk, vagyis az A lánc 5 S-tio-etil-Cys származékával és a B lánc S-szulfo-Cys származékával. A következő táblázatban szereplő összes szintetikus analóg relaxin-szerű biológiai aktivitást mutat a patkány-méh összehúzódási 10 vizsgálatban. Az egyedi peptid láncok kombinációjának kitermelését a biológiai vizsgálatok eredményeiből számítjuk, természetes sertés relaxin A(l-22)-B(l-31)-et használva standardként. 35 TÁBLÁZAT Szintetikus H 1 hu- A kombináció kitermcmán relaxin analó- lése (a B-lánc menygok nyiségére alapozva A(l-24) + B(1—23) 0.24% 25 A(l-24) + B(1—25) 0.70% A(l-24) + (AlaM)B(l-26) 0.92% A( 1—24) + Bíl-32) 2.00% GCA GAA ACC ATG CCA TCC TCC TTA AAG ATG ATG TTG GAA TTT CTG AAG GCA ACA TTG TCT GAC CTA CAA CAA TCT GCA TCA AAG A( 1—24 ) + B(l-25)amid 0.80% A(l-24) + B(l-25)amid, mindkét 3.10% láncban S-tioetil formát alkalmazva a kombinációs reakcióban A( 1—24) + B(3-25)amid 0.68% A( 1—24 ) + (N-formil Trp2) B(2—25) 0.43% SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás humán Hl preprorelaxint kódoló DNS vagy még relaxin-hatású fehérjét kódoló alegysége előállítására, azzal jellemezve, hogy humán geriom klón készletet, vizsgáló mintaként alkalmazott humán relaxin gén vagy sertés relaxin gén alegységgel végzett hibridizációval átvizsgálunk, és az alkalmas hibridizáló DNS szekvenciákat kiválasztjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy vizsgáló mintaként a sertés relaxin C pepiid 45-95. aminosavának megfelelő, alábbi képle tű gént alkalmazzuk: ATC ACC AAA GAT GCA GAA ATC GTT CCT AAT TTG CCA CAG GAG AGG GAT CAA TCG. CCA TCA CTG AGA GAG 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás az alábbi mRNS szekvenciának megfelelő kettősszálú DNS vagy ennek a DNS szekvenciának a természetes Lriplett-degenerációjá- 40 hói eredő variánsai vagy mindezek még relaxiri-hatású fehérjéket kódoló alegységei előállításéra: AUG CCU CGC CUG uuc UUG UUC CUA CUG AAC CAA UUU UCC AGA GAC GAU GUU AUU AAA UUA UGC CAG AUU GCC AUU UGC GGC AUG CUG AGC CAG GAA GAU GCU CCU GAA AUU GUA CCA UCC UUC AUC AUU AUC AUG UUG GAA UUC AUU AAG GCA GCC CUA UCU GAG AGG CAG CAG UAU GUA CCU GCA UUA GAA GAA UUU AAG AAA CUU AUU GCA GAC AGC AAU CCU UCA GAA ACU CAU UCU CAA AAA AAG AGA GAG AAA UGU UGC CUA AUU GGU AAA UAU UGC UGA azzal jellemezve, hogy a tárgyi kör szerinti DNS szekvenciákat választjuk ki. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás az alábbi mRNS szekvenciának megfelelő kettősCAC CUG CUA GAA UUC UGU UUA GCA GUC GCG GCC AAA UGG AAG GGC CGC GAA UUA GUU CGC GCG AGC ACC UGG AGC AAA AGG UCU CAG ACA CCU AGA CCA GUG GCA AAC AAA GAU ACA GAA ACU AUA GCU AAU UUG CCA CCG GAG CUG CAA CCA UCA UUA CCA GAG CUA AAG GAU UCC AAU CUU AGC UUU CGC AAU AGG CAA AGU GAA GCC UUA AAA UAC UUA GGC UUG GAU CGA ccc UAC GUG GCA CUG UUU UGU ACC AAA AGG UCU CUU GCU szálú DNS vagy ennek a DNS szekvenciának a természetes triplett-degeneréciójából eredő variánsai vagy mindezek még relaxin-hatású fehérjéket kódoló alegységei előállítására: 12
