197350. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán relaxint kódoló gén molekuláris klónozására és jellemzésére, valamint humán H1 relaxin előállítására
AAA UGG GUU CGC AAA AGG CCA GUG GAA ACU CCG GAG CCA GAG CUU AGC AGU GAA GGC UUG GCA CUG UCU CUU 22 AAG GAC GCG CAG UCU CUG GCA GAA AUA AUU CUG AAG CUA CAG UUU GAA GCC GCA GAU ACU UUU GAG GCU AAA GAU GUU AUU GCC AGC CAG AUU GUA AUC AUG GCA GCC CAG UAU GAA UUU GAC AGC CAU UCU AAA UGU UAU UGC 197350 AUU AAA AUU UGC GAA GAU CCA UCC UUG GAA CUA UCU GUA CCU AAG AAA AAU CCU CAA AAA UGC CUA UGA UUA UGC GGC AUG GCU CCU UUC AUC UUC AUU GAG AGG GCA UUA CUU AUU UCA GAA AAG AGA AUU GGU 23 GGC CGC AGC ACC CAG ACA AAC AAA GCU AAU CAA CCA AAG GAU CGC AAU UUA AAA CGA CCC UGU ACC GAA UUA UGG AGC CCU AGA GAU ACA UUG CCA UCA UUA UCC AAU AGG CAA UAC UUA UAC GUG AAA AGG azzal jellemezve, hogy a tárgyi kör szerinti DNS szekvenciákat választjuk ki. 5. Eljárás humán Hl preprorelaxint vagy alegységét kódoló DNS szekvencia fenntartására és replikálására alkalmas transzfer vektor előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárással előállított, megfelelő restrikciós enzimmel hasított DNS szakaszt egy, megfelelő restrikciós enzimmel hasított bakteriofágba iktatunk be. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy bakteriofágként X-fágot használunk. 7. Eljárás humán Hl preprorelaxint vagy alegységét kódoló DNS szakaszt tartalmazó E. coli sejt előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 5. vagy 6. igénypont szerinti eljárással előállított bakteriofággal E. coli törzset fertőzünk. 8. Eljárás humán Hl relaxin Arg-Pro-Tyr-Val-Ala-Leu-Phe-Glu-Lys-Cys-Leu-Ile-Gly-Cys-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-Ala-Lys-Tyr-Cys aminosav-sorrendű A láncának, illetve legalább a 10-24. aminosavat tartalmazó részeinek megfelelő polipeptidek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő, védőcsoportokkal ellátott aminosavakat a peptidkéraiában szokásos módszerekkel összekapcsoljuk, majd a védőcsoportokat eltávolítjuk. 9. Eljárás humán Hl relaxin Lys-Trp (vagy N-formil Trp)-Lys-Asp-Asp-Val-Ile-15 -Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Glu-Ile-Ala-Ile-Cys-Gly-Met (vagy Ala)-Ser-Thr-Trp-Ser-Lys-Arg-Ser-Leu aminosav-sorrendű B láncának, illetve legalább a 3-23. aminosavat tartalmazó részeinek, illetve 20 mindezek variánsainak megfelelő polipeptidek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő, védöcsoportokkal ellátott aminosavakat a peptidkémiában szokásos módszerekkel összekapcsoljuk, majd a védőcsoportokat eltávolít- 25 juk. 10. Eljárás humán Hl relaxin A láncát és humán Hl relaxin B láncát vagy a B lánc alábbi részei vagy variánsai valamelyikét tartalmazó humán Hl relaxin és analógjai elő-30 állítására: B{ 1—23), B(l-25) vagy ennek amidja, (Ala24)B(l-26), B(3—25) vagy ennek araidja, (N-formil Trpz)B(2-25), azzal jellemezve, hogy a 7. igénypont szerinti eljárással előállított A láncot és a 8. igénypont szerinti el- 35 járással előállított B láncot vagy a B lánc valamely, tárgyi kör szerinti részét vagy variánsát összekapcsoljuk. 11. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az A lánc és a B lánc 40 vagy annak része vagy variánsa S-szulfonált és/vagy S-tioalkilezett formáinak keverékét redukáljuk, a redukciós keveréket levegőn állni hagyva oxidáljuk, és a humán Hl relaxint vagy Hl relaxin analógot az oxidált ke- 45 verékből kinyerjük. 8 ábra oldal A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 90.2043.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató
