197046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás parazitaellenes hatású makrolid vegyületek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására és az ezeket tartalmazó növényvédőszerek

21

197 046

22

tomyces thermoarcliaensis NCIB 12111, 12112, 12113 és 12114 spóraszuszpenzióval.

A Streptomyces thermoarcliaensis NCIB 12111, 12112 és 12113 törzseket tartalmazó lombikokat 31 °C-on rázógépen inkubáltuk. A Streptomyces thermoarcliaensis NCIB 12114 törzseket tartalmazó lombikot 28 °C-on 2 napig inkubáltuk, majd a tenyészközegbői 1 ml-t átvittünk egy másik 250 ml-es Erlenmeyer-Iombíkba, amely 50 ml B tápközeget tartalmazott. Ezt a lombikot 31 'C-on rázógépen inkubáltuk. A rázatást minden esetben 250 ford, /perc sebességgel, 50 mm átmérőjű mozgással végeztük.

4 napig tartó inkubálás után minden tenyészközegbői 10 ml-t lecentrifugáltunk (1250 g, 40 perc), és a következőképpen dolgoztunk fel. A felülúszót eldobtuk, és a sejtmasszát metanollal 10 ml-re felöntöttük, és szuszpendáltuk. A szuszpenziót erősen összeráztuk, majd állni hagytuk 1 óra hosszat, közben egyszeregyszer felráztuk. A szuszpenziót ezután 10000 g-vel 5 percig centrifugáltuk, és a felülószót hplc-vel elemeztük (S5 ODS-2, 10 cmX4,6 mm, 70% CH3CN/0,1 mol/1 NH4H2P04). A csúcsokat 246 nsn-nél azonosítottuk.

A hplc-elemzés kimutatta az A, B, C és D faktorok jelenlétét minden esetben.

9 példa

Az A, B, C, D, E és F faktorok jellemzői a következők:

i) Csak szenet, hidrogént és oxigént tartalmaznak.

ii) Az A, B, C, D, E és F faktorok elektronütközéses (E. 1.) tömegspekíroszkópiás elemzése a következő eredményeket mutatta:

Faktor Molekula-ion Megfelelő képlet

A

612,37

CjgH^Og

B

598,35

c35H50o8

C

584,34

C34H4808

D

598,35

C35H5a08

E

612,3638

CjöHJ208

F

626,3807

c37h54o6

Gyors atomokkal végzett bombázás (FAB) következő eredményt mutatta:

Faktor

+ve FAB-ve FAB

moltömeg

A

M/Z 635 M+Na+ M/Z 613 M+H4

M/Z 611 M-II-612

B

M/Z 691 M+H+glicerin4 M/Z 599 M+H4 M/Z 581 MH-H20+ M/Z 563 MH-HjO4

598

C

M/Z 607 M+Na4

MZZ 583 M-l 1-584

D

M/Z 621 M+Na4

M/Z 597 M-l 1"

598

Az E faktor tér-deszorpciós tömegspektroszkdpiás vizsgálata a következő eredményt adta: M/Z 612 M', az F faktorra: M/Z 626 M4.

Az A faktor E. I. spektruma pontos tömegméréssel a következő ionokat adta: 612,37-néi C,6H5208j 466,31-nél Q0H„O4, 448,30-nál

C3oH4003) 425,23-ná! C.6H3305, 354,22-nél

QjHjqOs, 297,22-nél C^H^O, 278,1 l-nél

C15H180„ 247,17-né! C16H2302) 219,18-nál

C15H230, 95,05-nél C6H70.

A B faktor E. I. spektruma pontos tömegméréssel a következő ionokat adta: 598,35-nél

Cj3Hj0Og, 438,28-ná! C,8H3804, 420,26-nál

QgHjöOj, 314,19-néi C20H2SO3, 248,14-nél

QjH20O3> 151,08-nál C9Hn02.

A C faktor E. I. spektruma pontos tömegméréssel a következő ionokat adta: 584,34-nél

C34H4808, 566,33-nál C,4H4607j 438,28-nál

c28h38o4.

A D faktor E. I. spektruma pontos tömegmérés-45

50

55

60

65

sei a következő ionokat adta: 598,35-nél CjjHjgOg, 452,29-nél C29H40O4, 434,z8 C29H3803.

Az E faktor pontos tömegmérése az E. I. ionizációs módban a következő iont adta: 452,2908-nál C^H4004, és az F faktorra 466,3067-nél Cj0H24O4.

iii) Az A, B, C, D, E és F faktorok bromoformban a következő csúcsokat tartalmazó jellemző IR spektrumot mutatták (az értékek cm-1-ben vannak megadva):

A faktor: kb. 3510 (OH), 1712 (észter), 998 (C-O);

B faktor: kb. 3510 (OH), 1710 (észter), 996 (C-O);

C faktor: kb. 3510 (OH), 1712 (észter), 996 (C-O);

D faktor: kb. 3508 (OH), 1711 (észter), 996 (C-O);

E faktor: kb. 3500 (OH), 1708 (észter), 994 (C-O);

F faktor: kb. 3500 (OH), 1708 (észter), 997 (C-O).

12