196842. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hibrid DNS és az ezet tartalmazó kötő készítmények előállítására

1

2

196.841

juttatását a nehéz láncba az f. pontban adjuk meg. A szkémában a stop kodont (TGA) aláhúzzuk.

e. 5’-----------GAA ATC AAA CGT GCT GAT GCT TCA CC ■

3’------------CTT TAG TTT GCA CG A CT A CGA CGT GG

TTT GCA A CTA CGA CGT GG - 5’

Klenow-fragmens + dNTP-k GC

5 *--------3’----------5’----------3’--------* / \ .1 T'

_ AAA CGT T GAT GCT GCA CC -3-TTT GCA__A CTA CGA CGT GG -5’

c. szerint kezelve- AAA CGT TGA TGC TGC ACC -3’- -TTT GCA ACT A CG A CG TGG -5’

1-3--5’

1) Denaturálás

2) 3’ - TTT CCA ACT ACG ACG TGG 5

A

5’---------------AAACGT T GAT GCT GCA CC-------------------- ACC GTC TCC TCA GCC AAA ACG ACA---------------- 3’-TGC CAG AGG AGT CGG TTT TGC TGT-------------------5’

P Denaturálás

2) 3’ - GAG GAG TAC TTT TGT CTG T-5

/GCC\-A.CC GTC TCC TCA AAA ACG ACA -----------------3

3 - G AGG AGT TTT TGC TGT -5 \ACT^

Klenow-fragmens és dNTP-k GCC

V / \-ACC CTC TCC TCA AAA ACG ACA -3’

__________G AGG AGT TTT TGC TGT -5’

''ACT''

^ f c. szerint kezelve-ACC CTC TCC TCA TGA AAA ACG ACA -3’-TGG GAG AGG AGT ACT TTT TGC TGT -5’

A Klenow-fragmens és a négy dezoxi-nukleotid-trifoszfát hatására a kódoló szál 3-vége az oligomerrel nem komplementer első nukleotidda^ együtt lehasad és az oligomer 3-vége a kódoló szál,5-végének irányában komplementer kiegészítödik. így a konstans régiót meghatározó szekvencia, az oligonukleotidda! komplementer néhány nukleotidot kivéve lehasad.de

55 az ellenkező irányban kétszálú DNS épül fel.

A könnyű és nehéz lánc változó szakaszának hasított szekvenciáját tartalmazó heteroduplexcket ezután PstI linkerekhez kötjük, PstI endonukleázzal hasítjuk és beépítjük a pBR322 PstI helyére. Klónozást és újraklónozást követően a változó régió végén stop 60 kodont tartalmazó hasított kétszálú cDNS-t tartalma17