196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására
1 2 sósavoldattal semlegesítjük 0°C hőmérsékleten és csökkentett nyomáson eltávolítjuk a dioxánt. A maradékot 50 ml vízzel hígítjuk, és 2x50 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített etíl-acetátos extraktumot magnézium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk, 588 mg olajos maradékot nyerve, amit gyors-kromatografálással tisztjtunk, az eluens 3% metanolt tartalmazó kloroform. Így 288 mg olajos termékhez jutunk (4t%-os kinyerés). 'h-NMR (DMSO-dzr, 250 MHz): 5 0,81 (d, J = 7, 3H), 0,86 (d, J = 7, 3H), 1,38 (s, 9H), 2,2-2,4 (m, 2H), 5,02 (AB spinrendszer középpontja: J = 13, 2H), 6,48 (d, J = 9, 1H), 7,05 (d, J = 9, 1H), 7.3 (s, H). Tömegspektrum: m/e 186, 130, 86 (alapcsúcs). D) Az izoleucin-fenilalanin-benzilészter-hidroklorid előállításához 14,05 (58,5 mmól) N-(t-butil-oxi-karbonil)-L-izoleucin-hemihidrátot (Chemalog) oldunk 500 ml metilén-kloridban és MgS04-tal szárítjuk az oldatot. Szűrés után 6,43 ml (5,92 g, 58,5 mmól) N-metil-morfolint adunk hozzá. A reakciókeveréket —16°C hőmérsékletre hűtjük és 7,59 ml (7,99 g, 58,5 mmól) klór-hangyasav-izobutilésztcrt adunk hozzá olyan sebességgel, hogy az exoterm reakció a rendszert ne melegítse -1Ü°C hőmérséklet fölé. A reagens hozzáadása után 10 percen keresztül kevertetjük az oldatot, majd 24,8 (58,0 mmól) L-fenilalanin-benzilészter-p-toluolszulfonátot cs 6,43 ml (5,92 g, 58,5 mmól) N-metil-morfolint adunk 50 ml metilén-kloridban cseppenként hozzá, olyan sebességgel, hogy az exoterm reakció ne melegítse a reakciókeveréket -10°C hőmérséklet fölé. Amikor a hozzáadás teljes, hagyjuk a reakciókeveréket egy óra alatt szobahőmérsékletre emelkedni, majd 2x300 ml 5%-os vizes sósavoldattal és 2x300 ml 10%-os vizes KjCOi oldattal mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk, 27,40 g fehér szilárd anyagot nyerve. Ezt hexánban eldörzsölve, 24,97 g tisztított (N-/t-butil-oxi-karbonil/-L-izoleucin)-L-fenil-alanin-benzilésztert kapunk (42%-os kinyerés). Op : 131 —132°C. Rj-= 0,43 (etil-acetát/éter 1 : 1). !H-NMR (CDCh): §0,78—0,9 (széles, d, 6H), 1,43 (s, 9H), 3,08 (d, J = 6), 3,87 (dd, J = 5,9 1H), 4,75-5,1 (m, H), 5,06 (s, 2H), 6,3 (d, J = 9,1 H), 7,0-7,3 (m, 1H). 12,50 g (25,7 mmól) (N-/t-butil-oxi-karbonil/-L-izoleucin/-L-fenilalanin-benzilészter 125 ml 4 N sósavas dioxánban készült oldatát 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverte tjük, a levegő nedvességétől kálciumkloridos csővel védve. Az oldószert csökkentett nyomáson elpároljuk, és a maradékot éterben cldörzsöljük, 11,16 g terméket nyerve fehér szilárd anyag formájában. Op.: 178-179,5°C (bomlik). Rj- = 0,73 (butanol/víz/ecetsav, 4:1 : 1). 1 H-NMR (CD3OD): 6 0,9-1,1 (m, 6H), 3,1-3,0 (m, 2H), 3,73 (d, J = 5, 1H), 5,08 (s, 1H), 7,18 (s, 5H), 7,24 (s, 5H). E) Az (N-gamma-/t-butil-oxi-karbonil/-benzil-oxikarbonil-amino-sz tatin )-izoleucin-fenilalanin-benzil-észter előállításához 412 mg (1,02 mmól) izoleucin-fcnilalanin-benzilészter 10 ml metilén-kloridban készült oldatát 0°C hőmérsékleten 142 mikroliter (103 mg, 1,02 mmól) trietil-aminnal semlegesítjük. 416 mg (1,02 mmól) 3-benzil-oxi-karboníl-amino-4- -(t-butil-oxi-karbonil-amino)-3,4(S,S)-6-metil-heptánsavat és 205 mg, (1,52 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt adunk az oldathoz 0°C hőmérsékleten. Végezetül 210 mg (1,02 mmól) diciklohexil-karbodiimid 5 ml metilén-kloridban készített oldatát adjuk 0°C-on, hozzá. A reakciókeveréket 3 órán keresztül 0°C hőmérsékleten kevertetjük, majd szobahőmérsékletre melegítve további 16 órán keresztül. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és a maradékot 75 ml etil-acetátban kevertetjük. A kapott keverékből a szilárd anyagot szűréssel eltávolítjuk, a szürletet 75 ml 10%-os vizes citromsavoldattal, 75 ml telített vizes NaHCO, oldattal mossuk, MgSO.-tal szárítjuk és bepárotjuk, 217 mg szilárd maradékot kapva. Ezt egyesítjük a szűrésnél kiszűrt szilárd anyaggal (1. előbb). A termék és a ciklohexil-urea keverékéből álló, 1,043 g súlyú egyesített szilárd anyagot további tisztítás nélkül használjuk fel a következő reakciólépésnél. F) A benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-fenilalanin-benzilészter-hidroklorid előállításához az E) lépésnél nyert 1,043 g nyers (N-gamma-/t-butil-oxi-karbonil/-benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin)-izoleucin-fenilalanín-benzilészter 25 ml 4 N sósavas dioxánban készült oldatát egy órán keresztül kevertetjük szobahőmérsékleten, miközben a levegő nedvességét CaC^-os csővel zárjuk ki. Csökkentett nyomáson eltávolitva az oldószert metilén-klorid és éter azeotropjaként és a maradékot éterben eldörzsölve, 963 mg szilárd nyersterméket kapunk, ami a kívánt termék és diciklohexil-urca keveréke. A kapott nyersterméket további tisztítás nélkül használjuk fel a következő lépésnél. G) Az (N-a-/t-butil-oxi-karboni1/-N-im/-t-butil-oxi-karbonil/-hisztidin)-benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-fenilalanin-benzilészter előállításához az F) reakciólépésnél nyert 963 mg nyers benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-fenilalanin-benzilészter-hidrokloridot 20 ml metilén-kloridban szuszpendál-_ juk, és 0°C hőmérsékleten semlegesítjük 177 mikroliter (128 mg, 1,02 mmól) trietil-aminnal. A szuszpenzióhoz 542 mg (1,53 mmól) N-a-/t-butil-oxi-karbonil/-N-im-/t-butil-oxi-karbonil/-L-hisztidint és 206 mg (1,53 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt adunk OoC hőmérsékleten. Végezetül 1 ml metilén-kloridban 315 mg (1,53 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk 0°C hőmérsékleten hozzá. A reakciókeveréket 3 órán keresztül kevertetjük 0°C hőmérsékleten, majd további 16 órán át szobahőmérsékleten. Csökkentett nyomáson eltávolítjuk az oldószernek körülbelül a felét, és a maradékot 125 ml etil-acetáthoz keverjük. A nyert keveréket leszűrjük, eltávolitva ezzel a szilárd anyagot, és a szürletet 2x100 ml 10%-os vizes citromsavoldattal és 100 ml vizes telített NaHCO, oldattal mossuk, MgSO ,-tal szárítjuk és bepároljuk, 910 mg szilárd anyagól nyerve. Ezt az anyagot gyors-kromatográfiával tisztítjuk - az eluens, 0,5—0,75% metanolt tartalmazó kloroform - és így 221 mg tisztított termékhez jutunk szilárd anyag formájában. Az etil-acetátos keverékből szilárd anyag (1. előbb) a diciklohexil-urea mellett jelentős mennyiségű kívánt terméket tartalmaz. A kiszűrt szilárd anyagot 100 ml metilén-kloridban 196 833 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
