196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására

1

2

196 833

erélyes keverés közben eldörzsölve, és leszűrve, a diciklohexil-urea legnagyobb részét elválasztjuk. A szürlet bepárlásával nyert 1,1 g anyagot a fentiekkel azonos módon kromatografálva, további 401 mg termékhez jutunk. A tisztított termékeket egyesítve, éterben cldörzsöljük, és így 592 mg kívánt termékhez jutunk pelyhes, fehér szilárd anyag formájában (58%-os kinyerés).

Op.:229—231°C.

Rj-= 0,22 (2,5% metanol kloroformban).

1H-NMR (CDCK, 250 MHz): 5 0,6-0,85 (m, 12H),

1,42 (s, 9H), 1,58 (s, 9H), 2,42 (ABX spinrendszer AB középpontja: 2H, JAri = 14, JAY = 5, JnY = 10), 2,94 (d, J = 5, m), 3,13 (Cb = 6. 2Hj, 3,55-3,7 (m, 1H), 4,1 -4,3 (m, 3H), 4,98 (q, J = 7, 111), 5,2 5,5 (m, 4H), 6,10 (d, J = 7, 1H), 6,37 (széles d, 1H), 6,80 (d, J - 8,1H), 7,0 - 7,4 (m, 17H), 7,5 (széles, 1H), 8,00 (s, 1H).

H) A hisztidin-benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-fenilalanin-benzilészter-hidroklorid előállításához 204 mg (N-a-/t-butil-oxi-karbonil/-N-im/-t-butil-oxi-karbonil/-hisztidin)-benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-/fenilalanin-benzilészter 7 ml 4 N sósavas dioxánban készült oldatát 5 órán keresztül kevertetjük szobahőmérsékleten, a levegő nedvességét CaCl2-os csővel kizárva. Az oldószert csökkentett nyomáson, metilénklorid és éter azeotropjaként eltávolítva, 853 mg terméket nyerünk fehér por formájában (86%-os kinyerés).

Op.: 154-157°C.

Rf= 0,55 (butilalkohol/víz/ecetsav :4 : 1 : 1).

’h-NMR (CD.PD): § 1,05 1,1 (m, 12H), 2,3-2,5 (m, 2H), J,l(d. J = 8, 2H), 5,08 (s, 4H), 7,18 (s, 5H), 7,30 (s, 10H), 7,53 (s, 111), 8,83 (s, IH)

I) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin--benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-fenil-alanin-benzilészter előállításához 306 mg (0,352 mmól) hisztidin-benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-fenilalanin-benzilészter-hidroklorid 5 ml dimctil-formamidban készült oldatát 0°C hőmérsékleten 123 mikroliter (88 mg, 0,879 mmól) trietil-aminnal semlegesítjük. 0°C hőmérsékleten 103 mg (0,387 mmól) N-/t-butil-oxi-karbonil/-L-fenilalanint, 79 mg (0,580 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt és végül 980 mg (0,387 mmól) diciklohexil-karbodiimid 1,5 ml dimetil-formamidban készült oldatát adjuk az oldathoz. A reakciókeveréket 3 órán keresztül 0°C hőmérsékleten, majd további 16 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. Az oldószert erős vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 50 ml etil-acetátban kevertetjük és a kapott keveréket leszűrve, a szilárd anyagot eltávolítjuk. A szürletből elpároljuk az oldószert, a maradékot 50 ml nietilén-kloridban kevertetjük, és a keverékből további szilárd anyagot szűrünk ki. A második szűrés szürletét betöményítjük, a maradékot 50 ml etil-acetátban oldjuk, az oldatot 2x40 ml 10%-os vizes citromsav oldattal és 2x40 ml telített vizes NallCOi oldattal mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk, 1 53 mg szilárd anyagot nyerve. Ezt, valamint az etil-acetátos és mctilén-kloridos kevertetésnél kiszűrt szilárd anyagokat egyesítjük, és gyors-kromatografálással tisztítjuk, eluensként 2-3%- metanolt tartalmazó kloroformot használva. 261 mg szilárd anyagot kapunk, amit éterben eldörzsölve 218 mg kívánt ter-5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

mékhez jutunk üveges szilárd anyag formájában (59%-os kinyerés).

Op.: 228 -229°C.

Rj. = 0,25 (5% metanol kloroformban).

’H-NMR (CDCl-j. 250 MHz): 5 0,6 0,8 (m, 16H),

1.26 (s, 9HX 2,38 (széles d, 2H), 1,8 3,0 (m, 2H), 3,15-3,4 (m, 4H), 4,1-4,0 (m, 1H), 4,1-4,2 (m, 1H), 4,2-4,4 (m, 2H), 4,6 (széles d, 1H), 4,9-5,2 (in, 6H), 5,9 6,1 (m, 1H), 6,78 (s, 1H), 7,2-7,4 (m, 22H), 7,49 (s, 1H).

J) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-amino-sztatin-izoleucin-fenilalanin-diacetát kívánt végtermék előállításánál 24 mg (0,023 mmól) (N/-t-butil-oxi-karbonil)-fenilalanin)-hisztidin-benzil-oxi-karbonil-amino-sztatin-izoleucin-fenilalanin-benzilészter 5 ml ecetsav/etanol, 1 : 1 arányú elegyében készült oldatához 12 mg 10%-os Pd/C katalizátort adunk, és a reakciókeveréket 2,9 bar nyomású hidrogéngáz alatt hidrogénezzük 3 órán keresztül szobahőmérsékleten. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk, és a szürletct bepároljuk. A bepárlási maradékot éterben eldörzsölve, 17 mg kívánt terméket kapunk fehér por formájában.

Op.: 155 I59°C.

Rj-= 0,58 (n-butanol/víz/ecetsav, 4 : 1 : 1). hl-NMR (CD3C02D, 250 MHz): 5 0,7-1,0 (m,

12H), 1,33 (s, 9H), 2,7-2,9 (m, 2H), 3,0-3,6 (m, 611), 3,6-3,9 (m, ló), 4,15-4,30 (m, 1H), 4,35-4,55 (m, 2H), 4,8-4,95 (m, 2H), 7,1-7,4 (m, 1011), 7,38 (s, 111), 8,78 (s, 111).

6. példa

Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-Phe)-His-Sta-Ala-Sta-Glu-dibenzilészter előállítását az alábbi reakciólépéseken keresztül valósítjuk meg.

A) Az (N-/t-butiI-oxi-karbonil/-alanig)-sztatin-glutaminsav-dibenzilészter előállításához 0 C hőmérsékleten 100 ml metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 324 mg (2,4 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt, 202 mg (2 mmól) N-metil-morfolint, 995 mg (2 mmól) L-glutaminsav-dibenzilészter-p-toluoIszulfonátot, 660 mg (2,4 mmól) N-(t-butil-oxi-karbonil)-sztatint és 1271 mg (80% tisztaságú, 2,4 mmól)

1 -cikIohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-toluolszulfonátot. Az oldatot 19 órán keresztül 20°C hőmérsékleten kevertetjük, majd egymást követően 5,5%-os vizes sósavval, telített vizes Na-HCOj oldattal és sóoldattal mossuk, MgSO^ felett szárítjuk. Szűrés és bepárlás után 1 269 g nyers (N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatin)-glutaminsav-dibenzilészterhez jutunk olaj formájában.

*H-NMR (CDC13): 55,2 (s, 2H, benzil CH2).

A 1269 g olajat 10 ml 3,7 N sósavas dioxánban oldjuk, és az oldatot egy órán keresztül hagyjuk állni szobahőmérsékleten. Az erős vákuumban tör-_ ténő bepárlás maradékát éterben eldörzsöljük, és nitrogéngázban szárítjuk, 900 mg sztatin-glutaminsav-dibenzil-észter-hidrokloridot kapva hab formájában.

!H-NMR (CDCIj): 5,2 (s, 2H, benzil CH2).

60 ml, 0°C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 186 mg (8,38 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt 116 mg (1,15 mmól) N-me-9