196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására
1 2 f) lépés (N-ct/tercier-Butoxi-karbonil-fenil-alanin/-N-im--/tercier-butoxi-karbonil/-N-metil-hisztidin)-cikloszta-tin-lizin-fenil-alanin 470 mg (0.387 inmól), az e) lépésben leírt módon kapott (N-<X-/tercier-butoxi-karbonil-fenil-alanin/-N-im-/tercier-butoxi-karbonil/-N-metil-hisztidin)-oiklosztatin-N-/N-epszilon-benziloxi-karboni]-lizin/-fenil-alanin-benzil-észtcrt hozzáadunk 20 ml metanol és 2 ml ecetsav elegyéhez, majd az elegyhez 80 mg 20%-os csontszenes palládium-hidroxid-katalizátort adunk. A reakcióelegyet Super-Cel szűrőrétegen átszűrjük, és a szürletrfíl az oldószert ledesztilláljuk. Ily módon fehérszínű, porszerű anyag formájában 337 mg terméket kapunk, *H-NMR-spektrum (250 MHz, DSMO-d^, részleges spektrum): 1,29, 1,27 és 1,25 (s, összesen 9H, tercier-butoxi-karbonil-csoport jelei az egyes izomerekben), 1,42, 1,48 és 1,50 (s, összesen 9H, az imidazolgyűrű nítrogénatomjához. kapcsolódó tercier-butoxi-karbonil-csoport jelei az egyes izomerekben), 2,75, 2.95 és 3,02 (s, izomer N-CIU), 4,22, 4,52 5.05. 5,25, 7,66, 7,84 (m, 1-1H), 7,0 -7,3 (m, aromás), 7,32 és 7,42 (s, összesen 1H, imidazolil H-4- jelek az egyes izomerekben), 8,03 és 8,10 (s, 1H összesen, imidazolil H-2-jelek az egyes izomerekben). g) lépés N-(tercier-Butoxi-karbonil)-Phe-N-metil-His-cSta-Lys-Phc 20 ml metanolhoz hozzáadunk 358 mg (0,341 mmól), az f) lépésben leirt módon kapott terméket és 94 mg (0,682 mmól) kálium-karbonátot. A reakció 2,5 óra alatt lejátszódik, ezután az elegyhez hozzáadunk 200 ml ecetsavat. Utána az elegyet 1 ml térfogatra betöményítjük, a maradékhoz hozzáadunk 150 ml ecetsavat és 1 ml 0,1 mólos ammónium-acetát-oldatot (pH = 4,3) és az izomereket nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás módszerrel szétválasztjuk. Az L-hisztidint tartalmazó izomert eldörzsölve fehérszínű, porszerű anyagot kapunk. ^H-NMR-spcktrum (250 MHz, DSMO-dg, részleges spektrum): deltáig = 0 : 1,29 (s, 9H, tercier-butoxi-karbonil-csoport), 2,86 és 3,05 (s, összesen 3H, N-CH3X 6,75 és 6,85 (s, összesen 1H, imidazolil H-4- a két rotációs izomerben), 7,51 (imidazolil-H-2). 23. példa (N-/lercier-Butoxi-karbonil/-Phe)-N-metil-His-Sta-Ile-Phe a) lépés N-im-(tercier-Butoxi-karbonil)-N-metil-hisztidin 600 mg (2,93 mmól) ismert módon előállított (J. Med. Chcm. /I968/, 11 258 260) N-metil-hisztidint, 1,65 ml (11,2 mmól) trictil-amint, 1,48 ml (6,4 mmól) tercier-butoxi-karbonil-azidot, 8,5 ml 10%-os nátrium-hidrogén-karbonátot és 10 ml 2 normál sósavat feloldunk 5 ml dimetil-formamidban. A reakció lejátszódása után a dimetil-formamidot ledesztilláljuk, és a maradékhoz hozzáadunk 15 ml etil-acetátot és 15 ml 10%-os nálrium-hidrogén-karbonát-oldatot. Az elegyet kétszer 5 ml ctil-acetáttal mossuk, majd 8 ml 2 normál sósavval megsavanyítjuk, és négyszer 20 ml etil-acetátta) kirázzuk. Az etil-acetátos részt telített nátrium-klorid-oldattal mossuk és megszárítjuk. Az oldószer ledesztillálása útján habos anyag formájában 846 mg terméket kapunk. 1 H-NMR-spektrum (60 MHz, CDC1 =, részleges spektrum): 1,4 (s, 9H, tercier-butoxi-karbonil-csoport), 1,6 (s, 9H, tercier-butoxi-,karbonil-csoport), 2,8 (s, 3H, N-CHA 2,85 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 7,2 és 8,1 (s, 1-lH,imidazolil-CH). b) lépés (N-im-/tercier-Butoxi-karbonil/-N-metil-hisztidin)-Sta--Ile-Phe-benzil-észter 8 ml diklór-metánhoz hozzáadunk 179 mg (0,43 mmól) sztatin-izoleucin-fenil-alanin-benzil-észter-hidrokloridot, 316 mg (0,65 mmól), az a) lépésben leírt módon előállított N-im-(tercier-butoxi-karboni])-N-metil-hisztídint, 91 fA trietil-amint, 165 mg (1,07 mmól) 1-hídroxi-benzotriazolt és 134 mg (0,65 mmól) diciklohexil-karbodiimidet. A reakció körülbelül 7 óra alatt játszódik le. Ezután a reakcióelegyet diklór-metánnal hígítjuk, a szilárd részeket kiszűrjük, és a szürletről az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot 40 ml etil-acctáttal kivonatoljuk, az oldatlan részeket kiszűrjük, a szürletct kétszer 5 ml 1 normál nátrium-hidroxid-oldattal, majd telített nátrium-klorid-oklattal mossuk és nátrium-szulfonáton megszárítjuk. Utána az oldószert ledesztilláljuk, ily módon habos anyag formájában 235 mg terméket kapunk, hozam: 62%. 1 H-NMR-spektrum (250 MHz, CDCU, részleges spektrum)' 0,82 (m, 12H), 1,45 (s, 9H, tercier-butoxi-karbonil-csoport), 1.60 (s, 9H, az imidazolgyűrű nitrogénatomjához kapcsolódó tercier-butoxi-karbonil-csoport), 1,80, 2,33, 2,52, 2,91, 3,24, 3,67, 4.05, 4,25, 6,82 (m, 1 1H), 2.93 (s, 3H. N-CH,). 3,12 (m, 2H), 4,8 5,0 (m, 2H), 5,13 (AB difblettek, CHtO). 7,0-7,4 (m, 12 15H), 7,96 (s, 1H, imidazolil .11-2). c) lépés N-Metil-His-Sta-Ile-Phe-benzil-észter-hidroklorid 228 mg (0,26 mmól), a b) lépésben leírt módon kapott terméket feloldunk 4 normál dioxános sósavoldatban. Ily módon a cím szerinti vegyülethez jutunk. 1 H-NMR-spektrum: (250 MHz, DSMO-dg, részleges spektrum): 0,7-0,95 (m, 1211), 3.03 (m, 2H), 3,8 (m, 2H), 4,25 (m, 2H), 4,55 (m, IH), 5.05 (AB dublett, 2ÍI, OCH7), 7.1-7,4 (m, 1211), 7,50 (s, IH, imidazolil-H-4), 7,85 (d. IH), 8,6 (m, 211), 8,8 (széles IH). d) lépés (N-/tercier-Butoxi-karbonil/-Phe)-N-metil-llis-Sta-lle--Phe-benzil-észter 1 ml diklór-metán és 1 ml dimetil-formamid elegyéhez hozzáadunk 100 mg (0,133 mmöl), a c) lépésben leírt módon kapott terméket, 41 mg (0,154 mmól) tercier-butoxi-karbonil-fcnil-alanint, 50 gtl 196 833 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 15
