196745. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns és citosztatikus hatású N-(aminoimino-metil) izotiurónium származékok előállítására
1 2 2. ln vivo: a) NK-ly-ascites linifoma 20 dn CFLP 30 g átlagsúlyú hím egeret intraperitonealisan 1 millió Németh-Kellner-féle ascites limfoma sejttel oltottunk le (a new mouse ascites tumor to be used as a screening tool. Neoplasma 8.337.1961.). Az állatok fele kontrollként szolgált, a másik felét a különböző származékok LDTM tizedeivel (ennek hatásossága esetén kevesebbel) per os és ip. kezeltük egy ill. öt egymás utáni napon. Az egy alkalommal kezelt csoportból 24 óra múlva az ascites kenet citomorfológiai vizsgálatát végeztük el és értékeltük a károsodott ill. pusztult sejtek részarányát. Az öt napig kezelt csoportoknál a túlélést vizsgáltuk. b) L1210 tumor 20aib BDFj nőstény, 20 g-os egeret oltottunk be lCr Li-ji« tumorsejtekkel i. p. A kezelést (5—5 állatnak, a—50-500 ing/kg p. o. naponta, 5 kontroll). 24 órával a tumor oltása után kezdtük és 8 napon át folytattuk. A túlélést vizsgáltuk. c) Lewis long tumor 6—6 kezelt (5 és 50 mg/kg és 6 kontroll állatot C<r7Bl nőstény, 20 g-os) használtunk. A tumort subeutan adtuk, a jobb combizomzatba. 10 nap után a combot amputáltuk, majd a kezelést megkezdtük, per os és 9 napig folytattuk. Utána az állatokat leöltük és stereomikroszkóp alatt megszámoltuk az áttéteket. d) Különböző fajtájú spontán emlőtumoros (ductus cc.-ás) kutyát kezeltünk 4 héten keresztül a kiemelt anyagok 1)10 mg/kg-os per os adagjaival. Próbaexciziót végeztünk, mely során szövettani mintát vettünk hisztológiai elemzésre. Kiemelkedő daganatgátló hatásúaknak találtuk a 13., 27., 14., 1,5 , 28., 11., 34., 36., 38. példa szerinti vegyületeket. Így a 11. példa szerinti s-allil származék a K-562 humán eritroleukaemia sejtjeit szövettenyészetben már 4 Aig/ml koncentrációban gátolja, viszont a P-388 sejtek szaporodását csak 40 jug/ml koncentrációban gátolja és nagyobb koncentráció 400 ,ug/ml sem fokozza a hatást. Az erősen ható anyagok 0.5—5 ;ug/ml koncentrációban dózisdependensen hatnak, a gyengén gátlók nem dózisdependensek. In vivo vizsgálatokban az Lj2jq tumorra a család tagjai nem, vagy alig hatottak. A Lewis long tumorban a tüdő áttétek számát jelentősen csökkentik. A 13, 27, 14, 15, 28, 11,22,45 LD<-0 tizedénél kisebb dózisban is hatásosak. Ezek közül a 11-es számú példa szerinti hatóanyag már 5 mg/kg dózisban felére csökkenti a tüdőáttétel számát, ami különösen azért jelentős mert az LDTM = 2380 mg/kg. Tapasztalataink szerint a dózis növelésével kevésbé lehet a hatást fokozni, mint a kezelés ismétléseivel. Nk-ly-ascites tumorra citológiai vizsgálatok alapján az LD<-«-tizedénél kisebb koncentrációban hatásos molekulák a 13., 27., 14., 11., 20., 22., 45. példák szerint előállítottak. Az utóbbi anyagok dózis függően fokozták a túlélést és az élettartamot. Kis dózisban immunstimuláns hatásúak, nagyobb dózisban érvényesül a direkt daganatellenes hatás is. Pl. a 11. sz. 25 mg/kg, a 22.. sz. 40-160 mg/kg között citotoxikus. Kutyák spontán emlőtumorában erős hatásúak az S-allil és az S-l-Cl-2-OH-propil, S-lBr-2-OH-propil származékok. Három-négy hetes kezelés után vett biopaziákban invaziv jellegű sejtes infiltrációt láttunk a daganatban (ductus cc.), mely limfocitákból és neutrofil granulocitákból, makrofágokból, elvétve eozinofil granulocitákból állt. A daganatsejteken degeneratív elváltozások és nagyfokú szétesés látható. Az NK sejtek a daganatsejtekkel plasmahidakkal kapcsolatot létesítenek és ennek hatására a daganatsejtek plasmája vakoulásan degenerálódik, a magokban a DNS állományban nagy felritkulások keletkeznek A mag-plasma reláció megváltozik, a nukleoluszok erősen megduzzadnak a plasma bazofilitása csökken. Az esetek kb. egynegyedében a daganatban a leukocitás infiltráció elhanyagolható, viszont a daganatsejtek felpuffadtak és hialinosan degenerálódtak. A sejt közötti állományban igen nagy mennyiségű hialin festődésű anyag rakódott le. Humán csonttételes emlőtumorokban, petefészek tumorban, pancreas daganatoknál a 11. sz anyag 30- 120 mg-os napi dózisainál (0,5-2 mg/kg) jelentős javulás, illetve gyógyulás volt elérhető fél-tői egy évi peroralis szedés alatt. Tumor-ellenes hatás vizsgálata kombinációkban 1) Ismert citosztatikumokkai kombinálva: Különböző biológiai alkiláló hatású citosztatikumokat adtunk együtt az I általános képletű vegyületekkel NY-ly ascites tumoros CFLP egereknek. A citosztatikumokat az LD<-0 ötödében, tizedében, illetve az irodalomban elfogadott leghatékonyabb dózisban adtuk per os, intraperitonealisan, illetve intravénásán. Az I általános képletű vegyület család tagjaival per os az LD^q tizedével és húszadéval végeztünk kezelést egy, vagy több alkalommal a citosztatikum adása után 48 órával. A citosztatikumok közül kombinációban vizsgáltuk például a ciklofoszfamid a carnomustin, a degranol, a dibrómdulcit és a dibrómmannit kombinációját a 13, 27, 14, 15, 28. 16. 11. 45 vegyületekkel. A kontroll citosztatikummal kezelt csoporthoz képest fokozódott a daganatgátló hatás és csökkent az immundepresszió. 2) Ismert vitaminokkal kombinálva: Állatkísérletekben és humán terápiás esetekben is eredményesen kombinálhatok a fenti izotiuróniumok A, D«-közepes. és a C vitamin nagy dózisaival. 3) Ismert hormonokkal kombinálva: Hormon dependens tumorok kezelésében mind az állatkísérletekben, mind humán vonatkozásban előnyös a kombináció. 4) Műtéti megoldással kombinálva: Állatkísérletekben a solid tumorok esetében műtéti elő- és utókezelésre eredményesen használtuk (NK-ly solid, Yosida). Kísérleteink alapján valószínűleg humán esetekben is műtéti elő és utókezelésre felhasználható. Parazita ellenes hatás vizsgálata: Kullanccsal (Ixodes ricinus) fertőzött kutyáknak három napon keresztül per os adtuk az I általános képletű vegyületeket, így pl. 1-2 mg/kg N-(amino-196 745 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
