196745. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns és citosztatikus hatású N-(aminoimino-metil) izotiurónium származékok előállítására
1 2 VI. táblázat I általános képletű vegyületek 24 órás acut toxicitása ____________(Li tchfield-Wilcoxon) N N - C - NH 2 It NH Pél- R2 da- C = N - R2 S - R1 R1 X = halogénatom Hx LD50 mg/kg i- p. 9 H metil 2320 ± 220 23. H etil 3080 ± 290 10. H propil 2800 ± 260 25. H butil 2700 ± 310 24. H i-propil 2260 ± 210 26. H i-amil 2260 ± 241 13. H 2-klóretil 1120 ± 140 27. H 2-brómetil 1050 ± 280 14. H l-klór-2-OH-propil 1240 ± 160 15. H 3-klórpropil 1210 ± 180 28 H 3-brómpropil 980 ± 640 16. H 2-hidroxietil 3280 ± 460 1680 ±210 29. H 1-oxipropiI 2860 '± 180 11. H allil 2380 ± 210 320 ±30 44. H metallil 1640 ± 210 18.' H benzil 2420 ± 260 17. H propargil 90 ± 7,6 20 metil allil 600 ± 54 75 ±6,3 34. etil allil 780 ± 62 84 ±7,6 22. ciklohexil allil 450 ± 51 65 ± 5,1 21. izopropil allil 280 ± 26 32 ± 4 45. allil allil 380 ± 41 36 ± 4 22. ciklohexil allil 400 ± 38 40 ± 6 Előzetes gyorsteszt a tumorgátló és immunstimuláns hatás vizsgálatához A módszert laboratóriumunkban dolgoztuk ki nagy számú kísérleti minta vizsgálatára. CFL.P 30 g átlagsúlyú hím egereket ip. leoltunk négy millió ascites lymphoma sejttel. A vizsgálatot azokon az állatokon végezzük el, amelyeken a negyedik napon szemmel jól látható a dganat, vagyis ascites fejlődik ki. Kísérleti anyagonként legalább 10 egeret kezelünk az LD^g egytizedével p. o A per os kezelés után 24 órával, azonos számú kontroll állat mellett végezzük a kiértékelést az ascites kenet Gicmsa festésével cytológiai elemzés alapján. Értékeljük a daganat sejtek károsodását, a szervezet aktiválódását és az esetleges toxikus hatásokat. A tumorgátló hatás vizsgálatánál értékeljük a pusztuló és ép tumorsejtek százalékos arányát. Nulla és 30% közötti tumorsejt pusztulás nem tekintendő hatásnak. 30 és 70% közötti pusztulást közepes hatásnak a 70 és 100% közötti pusztulást erős gátlásnak értékeljük. A szervezet védekező rendszerének fokozódását az ascites tumor sejtek között megjelenő a védekezésben résztvevő neutrophil granulocyták lymphocyták és makrophágok száma és aktivitása alapján értékeljük. A védekező rendszer aktivitását jelzi az is, hogy az ascitestben a fenti sejtek milyen arányban létesítenek plasmahidas kapcsolatot a tumorsejtekkel. Ezek alapján a kontrolihoz viszonyítva nincs hatás akkor, ha nincs különbség a fenti sejtek számában és aktivitásában, közepes hatás van, ha a kontrolihoz képest 20%-kal növekszik a sejtszám vagy az aktivitás, erős hatásúnak értékeljük ha ennél nagyobb a védekező rendszer sejtjeinek száma és aktivitása. (VJI. táblázat) A toxícitást úgy mérjük, hogy értékeljük a neutrophyl granulocyták és limphocyták morfológiai elváltozását, a plasma vasquolizációt a meg feltöredezést, polisegment képződést, toxikus granulációt. Nem toxikus a kezelés, ha saját sejtekben nincs ilyen elváltozás, közepesen toxikus ha 20%-ban van, erősen toxikus ha ennél nagyobb arányban fordul elő károsodás. VII. táblázat Tumorgátló és immunstimuláns hatás gyors teszt vizsgálat A vegyüld száma Tumorgátló hatás Immunsti- Toxikus hatás muláló hatás 9. közepes közepes közepes 23. közepes erős 0 10. közepes közepes 0 25. közepes közepes 0 24. közepes közepes 0 26 közepes közepes 0 13. erős gyenge 0 27. erős gyenge 0 14. erős gyenge 0 1 5. erős gyenge 0 28. erős gyenge 0 16. közepes erős 0 29. közepes közepes 0 11. erős erős 0 44. közepes közepes 0 18. fokozott 0 0 17. gyenge gyenge közepes 20. erős gyenge 0 34. közepes közepes 0 22 erős gyenge 0 21. erős gyenge 0 45. erős gyenge 0 22. gyenge gyenge 0 Daganatgátló hatás vizsgálata 1. In vitro: A K-562 emberi eritroleukaemia sejteken és a P-388 egér limfoma sejteken szövettenyészetben végeztük a kezelést 1-100 Atg/ml anyaggal. 196 745 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
