196745. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns és citosztatikus hatású N-(aminoimino-metil) izotiurónium származékok előállítására

1

2

I % 745

tását illetően korábbi közleményünkre utalunk (láng és mtsai, 1980). (I. Táblázat)

5 NK: Az NK aktivitást londal és Pro*s módszerével (1975) mértük kisebb módosításokkal (Láng és mtsai, 1981), A 51 Cr jelzett K-562 tumorsejteket 4 órán át inkubáltuk az effektorsejtekkel a 10% dekomplementált borjúsavsót tartalmazó TC 199 tápfolyadékban. A reakció leállítása után a lecentrifu•0 gáb sejtek felülúszójának radioaktivitását (króm-release) mértük gamma-számlálóban. A célsejtek pusztulását (citotixitás index %) a teszt release és spnntán-release különbségeként fejeztük ki.

I. Táblázat

All. példa termékének hatása az ADCC-re. Citotoxicitási index (%)-ban. Effektorsejt célsejtarány: 5:1. inkubációs idő 4 óra. Átlag ± S. E.

Csoport Kontroll Kezelés

(esetszám)

_|0

6,7 x 10 1 mól

(Ms.: 1(>4.7) 6.7 x 10'" mól

6,7 x 10'8 mól

Normál IADCC

42,0 ± 5,0

58,5 ± 5,2

64 ± 5,8

68,2 ± 5,3X

(10)

♦39%'

♦527-*62%

Csökkent ADCC

2,8 ± 0,8

6,35 ± 1,7

7,7 ± 1,9

10,2 ± 2,7X

(10)

*126% .

♦175%

♦264%

Ez utóbbi betegek kiválogatásakor a csökkent ADCC és NK aktivitást vettük figyelembe. A fagocitákat vasporos mágneses kezeléssel távolítottuk el.

ADCC: Az ADCC-t Perlmann és Perlmann (1970) módszere alapján határoztuk meg kisebb módosításokkal (Láng és mtsai, 1981), 10* 51 Cr-mal jelzett, csirkevörösvérsejt-elleni nyúlszérummal bevont csirkevörösvérsejteket a limtöcitákkal 4 órán át inkubáltuk 37 C-on. A reakció leállítása után a lecentrifugált sejtek felülúszójának akvitását határoztuk meg gamma-számlálóban. A króm-release mértékét citotoxicitási indexben (Cl%) adtuk meg. Ennek kiszámíx szignifikáns (p ),05)

35 illetve tokozza az NCMC és az ADCC reakciót. Egyéb immunológiai tesztek előzetes eredménye szerint fokozza a blasztos transzformációt és a migrációt.

A nitrogéneken történt helyettesítéssel a toxieitáshoz viszonyított mólarányos immunstimuláló hatás általában csökken.

40 Tekintve, bogy a daganatos betegek citotoxikus aktivitása csökken a betegség stádiumával arányosan, és a szokásos citostatikus kezelés ezt tovább csökkenti, roppant lényegesnek tartjuk, hogy a fenti vegyületek nem immundepresszorok, hanem erős immunstimutáló hatással rendelkeznek, ami a gyógyulás szempontjából döntő jelentőségű lehet.

II. táblázat

A 12. példa termékének hatása az NK aktivitásra. Effektorsejt-célsejtarány:

50 : 1, inkubációs idő 4 óra. Citotoxicit;

ási index (%) átlagértékei ±S. E.

Csoport

(esetszám)

Kontroll

6,7 x 10'10 mól

Kezelés (mól/ml) 6,7 x 10'9 mól

6,7 x !0'8 mól

Normál NK

32,9 ± 2,5

41 ± 2,9

43,4 ± 2,7

47,6

± 1.4

(8)

*25%

♦32%

♦45%

Csökkent NK

15,1 ± 2,4

21,6 ± 3,0

25,3 ± 3,2

32,2

± 3,2

(7)

♦43%

*68%

♦113%

A statisztikai számításokat egymintás teszttel végeztíik. A találmány szerinti (I) általános képlettel jelzett vcgyülctek közül néhány kiemelkedő immunstimuláns hatással rendelkezik pl. a 11, 12, és 16. példa terméke. Az anyagok a normál és az erősen lecsökkent NK és K sejt aktivitást jelentősen emelni képesek, még a normál szint fölé is. Ez a hatás olyan mértékű, bogy a tizedére lecsökkent citotoxikus aktivitást képesek a normál szintre emelni. (II: Táblázat).

A várható humán plasmakoncentrációnak megfelelő dózis tartományban az anyag dózisdependensen fokozza az emberi liinfociták NK és K sejt aktivitását.

x szignifikáns (p 0,05)