196744. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklohexán-alkánsavak előállítására
1 2 vaó bevitele érdekében, ezután a szilil-védőcsoportot eltávolítjuk tetra-n-butil-ammónium-fluorid segítségével. Egy alkiM-hidroxi-ciklohexil-2-enacetát keletkezik ebből a folyamatból. A kettőskötést ebben a vegyületben epoxiddá oxidáljuk megfelelő peroxiddal és a hidroxicsoportot ketonná oxidáljuk, amelyhez oxalil-kloridot és dimetil-szulfoxidot használunk valamely tercier amin jelenlétében és így a megfelelő epoxi-ketont kapjuk. Ezt a ketont Wittig-re akció ban kezeljük valamely alkalmas reagenssel és így a kívánt kiindulási anyaghoz jutunk, amelyet az előzőekben említettünk. Egy más megközelítés a kívánt közbenső vegyületek előállítására valamely 4-metoxi-benzol-alkánsav használata kiindulási anyagként. Ezt a vegyületet lítiummal és ammónium-hidroxiddal kezeljük, amelyeket terc-butanolban oldunk, így éter oldószerben a benzolgyűrűt részlegesen redukáljuk _ és így 4-oxo-ciklohex-l-en-propionsavat kapunk. Ezt" a savat megfelelő alkanollal kezeljük erős sav, így kénsav jelenlétében, így a szabad savat a megfelelő észterré észterezzük és izomerizáljuk a kettőskötést a ciklusos keton karboniljával konjugációban. A ketont ezután a megfelelő alkohollá redukáljuk, amelyhez bórhidridet használunk metanolban cérium-klorid jelenlétében és a kettőskötést a megfelelő epoxiddá oxidáljuk alkalmas peroxid segítségével. A keletkező cpoxi-hidroxi-ciklohexén-alkanoátot ezután oxidáljuk oxalil-kloriddal és dimetil-szulfoxiddal valamely tercier amin, így trimetil-amin, jelenlétében. Ilymódon a hidroxicsoportot a megfelelő ketonná alakítjuk és ezt a ketont Wittig reakcióban megfelelő reagens segítségével a kívánt és az előzőekben leírt epoxiddá alakítjuk. A találmány szerinti eljárásnál használatos reakciókörülményeket részletesen leírjuk a példákban A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek felhasználhatók allergiás betegségekben, különösen tüdőasztmában, szenvedő betegek kezelésére. Az SRA-A (allergiás sokk lassan reagáló anyaga = slow reacting substance of anaphylaxis) olyan ismert anyag, amely nagyon fontos közvetítő az allergiás tüdőasztmánál. Az SRS-A lényegében olyan anyag, amely a szövetekben vagy azok közelében szintedzálódik és szabadul fel az érzékeny allergiás egységekben röviddel azután, hogy a megfelelő antigén az SRS-A-ra különösen érzékeny humán bronchusszal érintkezik. így egy olyan anyag, amely az SRS-A hatását ellensúlyozni tudná, hasznos lenne a tüdőasztma kezelésére. Az újabb kutatások kiderítették, hogy az SRS-A lényegében olyan anyagok elegye, amelyek peptido-leukotriénekként írhatók le. Az LTD4 ezeknek a leukotriéncknek az egyike és ezek képviselőjének tekinthető. így e specifikus anyag antagonizmusa olyan hatásokat okoz, amelyek általában hasonlók az SRS-A antagonizmusához. A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek hasznos anyagok LTD4-antagonistákként és felhasználhatók allergiás betegségekben, különösen tüdőasztmában, szenvedő betegek kezelésére. Ezek a vegyületek szelektívek antagonlsta hatásukra nézve, így nem tekinthetők a hisztamin vagy a carbachol versenytársainak. A találmány szelin ti. eljárással előállítható vegyületek hatását a következő vizsgálati módszerek segítségével mutatjuk be. Tengerimalac-csípőbél hosszanti izma Hím, Hartley-Duncan féle tengerimalacokat leoltunk nyakelmozdítással. A csípőbél végső szakaszát kivettük, leöblítettük és Burn által módosított Tyrode-féle oldatba helyeztük. A hosszanti izmot ezután gondosan kivettük a csípőbél körkörös izmából és ezt a hosszanti izmot 1-2 cm-es szegmensekre vágtuk. Ezeket a szegmenseket olyanQszövetfürdőben helyeztük, amely oxigénezett és 37 C-ra melegített, Burn által módosított Tyrode-féle oldatot tartalmazott. Ezután 1,0 g súlyt helyeztünk mindegyik izomszegmensre, majd 1 órai kiegyensúlyozás után 1 juM indometacint adtunk mindegyik fürdőhöz, öt perc múlva mindegyik izomszegmenst 60 nM koncentrációjú leukotrién D4 hatásának tettük ki. Az észlelt reakciót kezdeti legnagyobb kontrakciónak vettük, amelyet az egyes szegmensek mutattak. A szövetet ezután néhányszor lemostuk 1 óra alatt és ismét hozzáadtunk 1 jiM indometacint mindegyik fürdőhöz, öt perc elteltével vizsgálandó anyagot vagy vívőanyagot adtunk a fürdőhöz, majd 15 perc múlva egy koncentráció-reakció görbét vettünk fel, amelyhez a leukotrién D4 kumulatív módon növekvő koncentrációit használtuk fel. A koncentráció-reakciót ezután összehasonlítottuk a kezdeti legnagyobb kontrakcióval. A vizsgált vegyületet akkor tekintettük hatásosnak, ha egészen 100 uM koncentrációig a koncentráció-reakció arány jelentős mérvű jobbratolódását okozta a leukotrién D4-hez viszonyítva. Az antagonists hatást mennyiségileg pA2 értékben adjuk meg, amelyet Arunlakshana és Schild módszere szerint számítottunk ki (Brit. J. Pharmac. Chemotherap. 14.48. 1959). 3H-LTD4 — Specifikus receptor-kötődés tengerimalac-tüdő membránokban Hím tengerimalacokat felboncoltunk, a tüdejüket kivettük és jéggel hűtött 50 mM-os Trisz-HCl puffer-oldatba helyeztük, amelynek a pH-ját 7-re állítottuk be. A tüdőket ezután homogenizáltuk egy Polytron homogenizátorral és a homogén anyagot 1000 g-nél centrifugáltuk 10 percig 4óC-on. A felülúszót ezután 30000 g-nél centrifugáltuk 15 percig 4°C-on és így membránpelleteket kaptunk. Ezeket a pelleteket újra szuszpendáltuk 50 mM Trisz-HCl-ben és így a tüdőmembránok szuszpenzióját készítettük el. Ezután kötéspróbákat végeztünk 50 mM-os Trisz-HCl-ben 7,6 pH-értéken és 37°C-on 20 40 perc inkubációs idő alatt. A kötött 3H-LTD4-et elkülönítettük a szabad 3H-LTD4-től gyors vákuumszűréssel Whatman GF/3 üvegszálas szűrőkön jeges hűtési! Trisz-HCl puffer felhasználásával és 3x4 ml-el való mosással. A szűrést és a mosást 8 másodpernél rövidebb idő alatt befejeztük. Ezután -megmértük a szűrők radioaktivitását. A 3H-LTD4 specifikus kötődést mint 3H-LTD4 kötősét határoztuk meg nem jelölt LTD4 kötődés távollétében kivonva belőle a 3H-LTD4 kötődést 2xl0'7 M nem jelölt LTD4 jelenlétében. A 3H-LTD4 specifikus kötődés az összes kötődés 60-80%-át tette ki. A vizsgált anyagokkal végzett kísérletek azt mutatták, hogy a vizsgált vegyület képes gátolni a 3H-LTD4 specifikus (fajlagos) kötődést. Ezeknél a vizsgálatoknál a vegyület koncentrációit megnöveltük annak érdekében, hogy blokkoljuk a 3H-LTD4 specifikus "kötődést. Azt a koncentrációt, amely 50%-kal csök-196 744 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
