196592. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új benzolszk és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
11 196 592 12 területeket, ezeket kivágjuk és folyadék szclntillációs eljárással mennyiségileg meghatározzuk. A találmány szerint előállított vegyületeket 50/rmól/l mennyiségben vizsgáltuk — ha más megjelölés nem szerepel. Eredményeinket az I. táblázatban foglaljuk össze, ahol a > 50 % gátlást okozó vegyülctek jelölése Egyes esetekben az eredményeket az ICS0 értékkel is jellemeztük. I. táblázat A vegyület száma > 50 %-os gátlás (előállítási példa) 50 /ummól/l-nél IC50 jummól/1 1. + 2. + 3. '+ 1,5 4. + 5. + 9,9 6. + 7. + 8. 4* 9. + 10. + 0,4 11. + 12. + ■ 13. + 14. + 15. + 16. + Az eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerint előállított vegyületek jelentős gátlást fejtenek ki az arachidonsav lipoxigenáz oxidációs termék, az 5-HETE szintézisében. 18 18. példa A 17. példa szerinti eljárást alkalmazzuk a találmány szerint előállított vegyületek által az arachidonsav ciklooxigenáz oxidációs termékei, a TxB2 és a PGE2 szintézisének gátlására kifejtett hatás vizsgálatára. A vizsgálat során a 17. példában leírt módon járunk el. A ciklooxigenáz-aktivitás meghatározására azonban a mintákat TxB2 és PGE2 autentikus referencia anyaggal kromatografáljuk etil-acctát, hangyasav 80:1 arányú elegyben és etil-acetát, izooktán, ecetsav, víz 110:50:20:100 arányú elegy felső fázisában. A kromatografálást követően a TxB2 és PGE2 standardoknak megfelelő területeket autoradiográfiásan azonosítjuk, kivágjuk és folyadék szcintillációs eljárással mennyiségileg meghatározzuk. Az eredményeket a 17. példában ismertetett módon értékeljük. A találmány szerint előállított vegyületeket a fenti módon vizsgálva a II. táblázatban összefoglalt eredményeket kaptuk: 11. táblázat A vegyület száma (előállítási példa) > 50 %-os gátlás 50 íimól/I-nél ICsb pmól/1 TxB2 pge2 TxA2 püe2 1. + + 2. + 3.-f • 7,2 > 100 4. + 5. + 3,2 > 100 6. + 7. + 8. +-f 9. + + 10. + + 6,3 > 100 11. + 13. + + 14. + Az eredményekből látható, hogy a találmány szerint előállított vegyületek jelentősen gátolják az arachidonsav ciklooxigenáz oxidációs termékek, a TxB2 és a PGE2 szintézisét. 19. példa In vivo vizsgálatot végeztünk annak meghatározására, hogy milyen mértékben gátolják a találmány szerint előállított vegyületek tengerimalacokban a hörgőösszehúzódás endogén mediátorai által kiváltott hörgőgörcsöt. A vizsgálatot a következő módon végeztük: Hartley törzsből származó hím, 250-350 g testtömegű tengerimalacokat az 1. és 3. napokon 10 mg csirke ovalbumin (OA) i.p. beadásával szenzitizáltunk, a vizsgálatot a 26. napon kezdtük. Az állatokat 50 mg/kg i.p. nátrium-pentobarbitállal anesztetizáltuk és kétoldali vagotóiniát végeztünk. A nyaki vénába kanült építettünk be a gyógyszer-injekciók beadására, a nyaki verőérbe pedig a vérnyomás nyomonkövetésére. Az állatok légcsövébe kanült helyeztünk, amelyen át miniatűr Starling pumpával mesterségesen lélegeztettük őket és ugyancsak ez a kanül szolgált a légzési térfogat változásának közvetett mérésére, amelyet később ismertetünk. A spontán légzés leállítására az állatoknak 2 mg/kg i.v. szukcinil-kolint adtunk. 10 mg/kg i.v. indomethacint adtunk be friss pufferben a 9. percben, hogy gátoljuk a lipoxigenáz úthoz vezető arachidonsav metabolizmust — az indomethacin ciklooxigenáz inhibitor —. 1 perc múlva 1,0 mg/kg, sóoldatban lévő klór-fenir-amint adunk be intravénásán az anafilaxiás hörgőösszehúzódás hisztainin komponensének gyengítésére. A propilénglikolban, polietilénglikolban vagy sóoldatban oldott vizsgálandó gyógyszert intraduodenálisan vagy aeroszol formájában adagoljuk 2-10 perccel az antigénhatásnak való kitétel előtt. Az anafilaxiás hörgőösszehúzó-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
