196560. lajstromszámú szabadalom • Eljárás interferon-alfát tartalmazó gyógyszer-készítmény előállítására
1 2 196.560- szorbitoldat 70%-os 2,000 g - citromsav — víz (1/1) 0,130 g-Na,HP04.2H,0 0,300 g- NaCl 0,500 g - benzalkónium-klorid 90%-os 0,020 g- ionmentesített víz 100 g-ig. Az IFN-alfa-2-t tartalmazó hidrogélt úgy állítjuk elő, hogy a hidroxi-propil-cellulózt meleg vízben 40 °C-on keverés közben feloldjuk. Ezután az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, és a hűtési fázis alatt hozzáadjuk a zselatint. Miután ez feloldódott, egymás után az oldathoz adjuk a benzalkónium-kloridot, a szorbitoldatot, a citromsavat, a dinátrium-hidrogén-foszfátot, a nátrium-kloridot és a Polysorbat 60-at. A kész gélhez szobahőmérsékleten óvatos keverés közben hozzáadjuk és homogénen elkeverjük a sósavas, 1% Polysorbat-ot tartalmazó IFN-alfa-2 oldatot. A keveréket lamináris légáramlás alkalmazásával steril alumíniumtubusokba töltjük. 5. példa — Szemre alkalmazható hidrogél 100 g gél összetétele: — IFN-alfa-2 1 . 108 NE — poliakrilsav (molekulatömege körülbelül 3 millió) (B.F. Goodrich Corp.,fi Cleveland/Ohio, USA, Carbopor) 0,10 g — zselatin, Bloom 160—200 0,30 g — Polysorbat 20 0,10 g — szorbidoldat 70%-os 2,00 g — glicerin 1,00 g-NaCl 0,100 g — cetrimónium-bromid 0,01 g — In nátrium-hidroxíd oldat (pH=7,4-ig) — ionmentesített víz 100 g-ig. Az IFN-alfa-2-t tartalmazó hidrogélt úgy állítjuk elő, hogy a poliakrilsavat és a zselatint vízben szobahőmérsékleten feloldjuk keverés közben, majd egymás után hozzáadjuk a szorbitoldatot, a glicerint, a nátrium-kloridot, a Cetrimónium-bromidot és a Polysorbat-ot. Teljes oldódás után az oldatot sterilen szűrjük és keverés közben szobahőmérsékleten pH-ját nátrium-hidroxid-oldattal körülbelül 7,6-ra állítjuk be, eközben gélesedik. Ehhez a gélhez azután szobahőmérsékleten óvatos keverés közben hozzáadjuk és homogénen elkeverjük a sósavat (0,001 n) és az 1% Polysorbat-ot tartalmazó IFN-alfa-2 oldatot. A töltés a korábbi példákhoz hasonló módon, lamináris légáramlás alkalmazásával steril alumíniumcsövekbe végezzük. 6. példa — Hüvelytabletta 100 g hüvely tabletta-massza összetétele:-IFN-alfa-2 1 .108 NE — hidroxi-etil-cellulóz 0,10g — zselatin, Bloom 160—200 10,00g-Na3HP04.2H30 0,16 g 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50-KH3P04 0,09 g - Polysorbat 20 0,10 g-glicerin 57,00 g- ionmentesített víz 100 g-ig. Az IFN-alfa-2-t tartalmazó hüvelytablettákat úgy állítjuk elő, hogy a hidroxi-etil-cellulózt a zselatinnal együtt 40-50 “C-on feloldjuk a glicerin és a víz keverékében, amely már tartalmazza a dinátrium-hidrogén-foszfát-víz (l/2)-t, a kálium-dihidrogén-foszfátot, valamint a Polysorbatot. Még viszkózis állapotban (körülbelül 37—40 °C-on) óvatosan hozzákeverjük az 1% Polysorbatot tartalmazó sósavas (0,001 n) IFN-alfa-2-oldatot és a kapott oldatot megfelelő hűtött formákba öntve azonnal megdermesztjük. 7. példa - Stabilitásvizsgálat zselatin nélküli és zselatint tartalmazó hidrogél összehasonlításával 100 g gél összetétele:-IFN-alfa-2 1 . 108 NE 1 . 108 NE — Nipagin M — zselatin, Bloom 0,200 g 0,200 g 160-200 — 0,500 g-NaCl 0,480 g 0,480 g — KC1 0,012 g 0,012 g — Na3 HP04,2H30 0,086 g 0,086 g-KHjP04.3H30 0,012 g 0,012 g — Polysorbat 20 — hidroxi-ctil-cellulóz (például Natrosol* 0,100g 0,100g 250 HX) — ionmentesített 2,000 g 2,000 g víz 100 g-ig. A pontozott görbék az 1-3. ábrán egy fenti összetételű, zselatint nem tartalmazó IFN-alfa-2, hidrogél stabilitásának alakulását, a kihúzott görbék a zselatinadalékot is tartalmazó, alumíniumtubusokba töltött gél stabilitását mutatják. Mindegyik pont 6 meghatározás átlagértéke, a meghatározásokat ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) vizsgálattal végeztük. Az 1. ábra -10 °C-on végzett tárolásnál^a 2. ábra +4 °C-on végzett tárolásnál és a 3. ábra +21 bC-on végzett tárolásnál mutatja a stabilitás alakulását, mindig összehasonlító vizsgálattal. A stabilitás alakulását 14 héten (3 és fél hónap) keresztül kísértük figyelemmel. Ennek során meglepő és teljesen váratlan módon megállapíthattuk, hogy a tárolási hőmérséklet növekedésével a stabilitási különbségek világosabbá válnak. A teljes 14 hetes időszak biológiai stabilitási eredményeinek összegezése és az értékek (n=ll) számtani középértékének (x) képzése a következő .táblázatban bemutatott eredményeket adja, a táblázatban a 10,0 értéket 100%-os, 108 NE IFN-alfa-2/100 g-nak megfelelő aktivitásnak vettük. tárolási hidrogél hőmér- zselatin nélkül séklet mt°S& különbség zselatin-adalékkal-10 °C + 4 °C +21 °C x (11) =8,49 x (11) =7,52 x (11) =5,67 (= -15%) x (11) =9,72 (= -3%) (= -25%) x (11) =9,97 (=+/-0) (= -43%) x (11) =8,87 (-11%) 12% 25% 32% 5
