196464. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás 1,2-dehidro-szteroidok előállítására
10 196464 11 15a 21-acetoxi-9-alfa-fluor-ll-béta,17-dihidroxi-16-béta-metil-pregn-l,4-dién-3,20-dion és 9-alfa-fluor-ll-béta,17,21- -trihidroxi-16-béta-metil-pregn-l,4-dién-3,20-dion 16a 21-acetoxi-9-béta,ll-béta-epoxi-17-hidroxi-16-béta-métil-pregn-l,4-dién-3,20-dion és 9-béta,ll-béta-epoxi-17,21-dihidroxi-16-béta-raetil-pregn-l,4-dién-3,20- -dion 17a 21-acetoxi-17-hidroxi-pregn-1,4,9(11)—-trién-3,20-dion és 17,21-dihidroxi-pregn-l,4,9(ll)-trién-3,20-dion 18a 21-acetoxi-16-alfa,17-dihidroxi-pregn-l,4,9(ll)-trién-3,20-dion _ és 16-alfa,17,21-trihidroxi-pergn-l,4,9(ll)-trién-3,20-dion 19a 21-acetoxi-7-hidroxi-16-alfa-metil-pregn-l,4,9(ll)-trién-3,20-dion és 17,21-dihi d r oxi-16-alf a-m e til-pr e g n-1,4,9 (11) - trién-3,20-dion 20a 21-benzil-oxi-17-hidroxi-16-béta-metil- pr e g n-1,4,9 (11)-tr ié n-3,20-d io n 21a 21-acetoxi-17-hidroxi-16-béta-metil-pregn-l,4,9(ll)-trién-3,20-dion és 17,21-dihidroxi-16-béta-metil-pregn-1,4,9( ll)-trién-3,20-dion 22a 21-acetoxi-pregn-l,4,9(ll),16-tetraén- 5 -3,20-dion és 21-hidroxi-pregn-l,4,9--(ll),16-tetraén,3,20-dion 23a 21-acetoxi-6-alfa-fluor-pregn-l,4,9--(ll),16-tetraén-3,20-dion és 6-alfa-fluor-21-hidroxi-pregn-1,4,9(11),16-tet- 10 raén-3,20-dion. 4. példa 15 A fermentlében lévő A. simplex és a szárított A. simplex sejtekkel két különböző szteroidot alakítottunk ét. Miután mindegyik ■ biokonverziót befejezettnek tekintettük (amit % maradék szubsztrátum szint csökkenésének 20 megállása jelzett), a keverékben lévő szteroidot extraháltuk és elkülönítettük, hogy mindkét eljárás jellemző körülményeit megkapjuk. A következő táblázat ezeket az eredményeket összegzi. A különböző típusú biokonverziók során kapott kitermelések összehasonlítása Szubsztrátum A biokonverzió fajtája A hasznos szteroid kitermelése (%) (a) % a’ vegyület % maradék Megjegyzés (I) képletű fermentáció 77.2 1. generáció 2.6 87.4 gyenge 1-devegyület 4- 2.8 2. generáció 10.4 83.6 hidrogénezés 10 g/1 szárított sejt 82.6 1. generáció + 9.9 2. generáció • 100.0 95.0 5.0 (II) képletű vegyület fermentáció 18.1 1. generáció 2. generációt nem kaptunk 59.1 40.9 (b) 6. g/1 szárított sejt 79.6 1. generáció 2. generációt nem kaptunk 97.8 2.1 (a) = A hasznos szteroidot vagy a’ vegyületként alkalmazzuk további szintézisekben, vagy egy másik biokonverzióba tápláljuk vissza, mint 1,2-dihidro-szubsztrátumot az adott termék előállításához. (b) = Más nemkívánatos szteroid molekulák jelentékeny mennyiségét is kinyertük. 5. példa Arthrobacter simplex baktériumot tenyésztettünk egy 5 literes .Microferm’ fermentorban, szteroid-l-dehidrogenáz szintézisre indukáltuk, és centrifugálással gyüj- 60 tóttük össze. A kapott sejtpaszta részleteit két különböző eljárásban használtuk fel. Az első eljárás során a sejteket csökkentett nyomáson 55 °C hőmérsékleten megszáritottuk. A második eljárás során a 3 360 439 65 számú USA-beli szabadalmi leírás által javasolt módszert használtuk, amikoris a sejteket acetonnal szárítottuk meg. A sejteket acetonnal kevertük össze, és csökkentett nyomáson 5 °C hőmérsékleten megszáritottuk. A megszáritott sejtkészitményeket ezután ű9'11-androsztén-dion biokonverzió jóhoz használtuk fel, úgy, hogy a konverziós elegyben a sejtkoncentráció 10 g/1, a szteroidkoncentráció 10 g/1 volt. 7
