196464. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás 1,2-dehidro-szteroidok előállítására
8 196464 9 hez. A keveréket 28 °C hőmérsékleten inkubáltuk keverés mellett. 4 órai inkubálás után 9IX szteroid alakult ét. A 6-alfa-metil-prednizolont szokásos módszerekkel választottuk el. 2. példa Androszta-l,4-9( ll)-trién-3,17-dión előállítása a) A biokatalizátor előállítása 6-6 g/1 glükózt, kukoricalekvárt és porlasztva szárított zsíremúlziót tartalmazó rázólombikokban Arthrobacter simplex (ATCC 6946) mikroorganizmust tenyésztettünk. A kultúrákat 28 °C hőmérsékleten rotációs rázóban addig inkübáltuk, amíg glükóz kimerülést nem észleltünk. Ekkor kortizon-acetátot (0,15 g/1) adtunk az elegyhez, hogy megindítsuk a szteroid-1-dehidrogenáz szintézist. Egy éjszakai inkubálás után a sejteket centrifugélással gyűjtöttük össze. A sejt pelleteket 55 °C hőmérsékleten alacsony nyomáson 24 órán át szárítottuk. 24 órával később a száraz anyagot egy légmentesen záródó tartályba tettük és 5 °C hőmérsékleten tároltuk, amíg a biokonverzióhoz fel nem használtuk. b) Az androszta-4,9(ll)-dién-3,17-dion biokon verziója 10 g/1 szárított sejtet 50 mmólos, 7,5 pH-jú foszfát pufferben rehidratáltunk keverés közben 30 percen keresztül. Ezután annyi menadiont adtunk a sejtszuszpenzióhoz száraz por formájában, amennyi a végső 86 mg/1 koncentráció eléréséhez szükséges. A' mik ronizált an d ros z ta-4,9(ll)-dién-3,17-diont dimetil-formamidban szuszpendáltuk és 2,5 g szteroid/1, illetve 2% (tf/tf) dimetil-formamid koncentráció eléréséig adagoltuk a reakcióelegyhez. A keveréket 31 °C hőmérsékleten mozgatás mellett levegő jelenlétében 24 órán keresztül keverve inkubáltuk. Az inkubáció befejezése után az androszta-l,4,9(ll)-trién-3,17-diont szokásos módszerekkel választottuk el. 3. példa A következő vegyületeket alakítottuk át 1,2-dehidro-származékaikká A. simplex mikroorganizmus segítségével: 1. androszta-4-én-3,17-dion 2. 6-alfa-fluor-androszta-4,9(ll)-dién-3,17- -dion 3. 6-alfa-metil-androszta-4,9(ll)-dién-3,17- -dion 4. 16-béta-metil-androszta-4,9(11 )-dién-3,17-dion 5. 17-alfa-hidroxi-pregn-4-én-20-in-3-on 6. 17-alfa-hidroxi-pregn-4,9(ll)-dién-20-in-3-on 7. 17-alfa-hidroxi-16-béta-metil-pregn-4,9- -(11 )-dién-20-in-3-on ;8. 11-béta, 21-dihidroxi-pregn-4,17(20)-dién-3-on 9. 21-acetoxi-ll-béta-hidroxi-pergn-4,17- -(20)-dién-3-on 10. 6-alfa-metil-ll-béta,21-dihidroxi-pregn-3,17(20)-dién-3-on 11. 20-klór-pregn-3,9(11),17(20 )-trién-21-al-3-on 12. hidrokortizon 13. 6-alfa-metil-hidrokortizon 14. 21-acetoxi-ll-béta,17-dihidroxi-16-béta-metil-pregn-4-én-3,20-dion 15. 21-acetoxi-9-alfa-fluor-ll-béta,17-dihidroxi-16-béta-metil-pregn-4-én-3,20- -dion 16. 21-acetoxi-9-béta,ll-béta-epoxi-17-hidroxi-16-béta-metil-pregn-4-én-3,20-dion 17. 21-acetoxi-17-hidroxi-pregn-4,9(ll)-dién-3,20-dion 18. 21-acetoxi-16-alfa,17-dihidroxi-pregn-4,9(1 l)-dién-3,20-dion 19. 21-acetoxi-17-hidroxi-16-alfa-metil-pregn-4,9( 11 )-dién-3,20-dion 20. 21- be nzil-oxi-17-hidroxi-16- béta-metil-pregn-4,9(ll )-dién-3,20-dion 21. 21-ace toxi-17- hi d roxi-16- béta- me til— -pregn-4,9(ll)-dién-3,20-dion 22. 21-acetoxi-pregn-4,9(11),16(17 )-trién-3,20-dion 23. 21-acetoxi-6-alfa-fluor-pregn-4,9(ll),16- -trién-3,20-dion. A konverzióban a kővetkező termékek keletkeztek: la androszta-l,4-dién-3,17-dion 2a 6-a)fa-fJuor-androszta-l,4,9( 11 )-trién-3,17-dion 3a 6-alfa-metil-androszta-l,4,9(ll)-trién-3,17-dion 4a 16-béta-metil-androszta-l,4,9(ll)-trién-3,17-dion 5a 17-alfa-hidroxi-pregn-l,4-dién-20-in-3- -on 6a 17-alfa-hidroxi-pregn-l,4-9(ll)-trién-20- -in-3-on 7a 17-alfa-hidroxi-16-béta-metil-pregn-l,4- -9(11 )-trién-20-in-3-on 8a ll-béta,21-dihidroxi-pregn-l,4,17(20)-trién-3-on 9a 21-acetoxi-ll-béta-hidroxi-pregn-l,4,17- -(20)-trién-3-on és ll-béta,21-dihidroxi-pregn-l,4,17(20)-trién-3-on 10a 6-alfa-metil-ll-béta,21-dihidroxi-pregn-l,4,17(20)-trién-3-on 11a 20-klór-pregn-l,4,9(ll),17(20)-tetraén-21-al-3-on 12a prednizolon 13a 6-alfa-metil-prednizolon 14a 21-acetoxi-ll-beta,17-dihidroxi-16-béta-metil-pregn-l,4-dién-3,20-dion és 11- -béta,17,21-trihidroxi-16-béta-metil-pregn-l,4-dién-3,20-dion 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
