196460. lajstromszámú szabadalom • Eljárás homogén immun interferon fragmens és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
14 196460 15 állítjuk be, hogy az A^ao 20—30 közötti érték legyen. A mintát 50 mmól nátriurn-kloridot tartalmazó megfelelő mennyiségű trisz-pufferrel (pH = 7,9) egyensúlyba hozott DEAE-cellulóz 5 oszlopon (8 ml, Wattman DE52) frakcionáljuk; az eluálást 50 mmól nátriurn-kloridot tartalmazó trisz-pufferrel, 1,5 ml/perc átfolyási sebességgel végezzük el. A fenti körülmények között antitest aktivitást főként a ki- 10 folyó frakciókban tapasztalunk. A SDS-PAGE-módszerrel [baemlie és társai: Nature 227, 680 (1970)1 igazoljuk, hogy a tisztított minta ténylegesen az antitest. Az ammónium-szulfátos kisó/ással és DEAE-cellulóz frakcionálással kapott frakciók közül néhányat 2-inerkapto-etanollal redukálunk, majd 17%-os SDS gél-elektroforézisnek vetünk alá 24 órán át 30 volt feszültség mellett. Az antitest aktivitás csúcsoknak- megfelelően két sávot tapasztalunk, a kb. 55 kilodalton (II lánc) és kb. 28 kilodalton 1L lánc) molekulatömegeknek megfelelő helyzetekben. Az ily módon tisztított antitest frakció 17 IFN-x-megkötő kapacitásának meghatározása céljából IFN-}í-t adunk hozzá (2200 U/ml). Azt találtuk, hogy az ÍFN-')| kb. 50%-a az antitesthez kötődik (4. táblázat). 4. táblázat Minta Hígítás Maradék IFN aktivitás (U/ml) *2-11.1 frakció 17 10-1 1100 10-2 1100 IO-3 2200 IO-4 2200 Anti-IgE monoklonális antitest 10-1 2200 IO'2 2200 IO’3 2200 IO-4 2200 9. példa 35 antitesteket (Miles) alkalmazva úgy, hogy olyan IgG al-osztály legyen azonosítható, Al-osztály, amelyhez a monoklonális anamelyhez *2-11.1 monoklonális antitestek tartitestek tartoznak tozhatnak. A monoklonális antitest és a kecske anti-egér IgG2b antitest között egyetlen Tisztított antitest frakciót (17 jelű) (8. 40 különálló sáv található, mig a monoklonális példa) 10-szeresére hígítunk és agaron im-antitest és a . többi anti-anti-test között nem • muno-kicsapásos reakciónak vetjük alá (Ouchterlony teszt: Immunological Methods, Gel-Diffusion Techniques, Blackwell, Oxford, 1964) kecske anti-egér IgGl, G2a, G2b és G3 figyelhető meg sávképzódés. Ennek megfelelően a monoklonális antitest az IgG2b-hez tartozik (5. táblázat). 45 5. táblázat Monoklonikus antitest al-osztály Antigén Anti-test Kicsapásos görbe Találmányunk szerinti monoklonális anti-test (Frakció 17) Anti-tgGl-Anti-IgG2aAnti-IgG2b +Anti-IgG3 9
