196435. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pankreatin kinyerésére
9 196435 10-95%-os acélon is használható, ehhez azonban oldószert kell cserélni. A kapott pankreatin üledék kiválóan szűrhető, így a legegyszerűbb, ha nuccson leszívaljnk. Természetesen önműködően dől- 5 gozó szűrőt vagy automata centrifugát is alkalmazhatunk. A maradékot a szokásos módon, például liofüezéssel tehetjük eltarthatóvá; előnyös azonban a következőképpen eljárni: 10 A kristálykása száradása közben - amihez 70-85%, előnyösen 75-80% izopropanol tartalmú a nyakig tapad - erős térfogatcsökkenést figyelhetünk meg. Ez a zsugorodási folyamat nagy térfogatsúlyú pankreatint 15 eredményez 10,5-0,7 g/ml), amiből dúrvaőrlés után jól szórható részecskék keletkeznek. Ezzel szemben, ha a szárítandó pankreatin izopropanol tartalma lényegesen 85-86% felett van, úgy nincs térfogatcsökkenés, és olyan 20 alacsony térfogatsúlyú termék keletkezik 10,2 g/ml), hogy ez elektrosztatikusán könynyen feltöltódik, és ezáltal nehezen kezelhető. Másfelől, ha a szárítandó pankreatin izopropanol tartalma 70% alatt van, úgy bekö- 25 vetkezik ugyan a kívánt térfogatcsökkenés, de a lipáz bizonyos mértékig károsodik, még ha a szárítást 0 °C-on, csökkentett nyomáson is hajtjuk végre. Enzimkárosodás akkor is felléphet, ha 25 °C felett szárítunk, vagy ha 30 - csökkentett nyomáson vagy anélkül - a szárítást olyan levegővel végezzük el, aminek relatív nedvességtartalma 20 °C-on több mint 20%. A most megadott értékek egy kevéssé függnek a tényleges izopropanoltartalomtól. A találmány szerint előállított pankreatin «•siraszegény. A csírák legnagyobbrészt a rostokon maradnak, amiről a pankreatin oldatot leszűrtük. Ezenkívül a szükséges koncentrációjú izopropanol tudvalevőleg a csirák elölésére szolgál, különösen azért, mert a kezdetben a tiszta vizes szuszpenzióban adott esetben jelenlévő spórák a autolízis közben az érzékeny vegetatív alakba mennek ét. A találmány szerint előállított pankreatin jó eltarthatóságát a terhelési próba teszi egyértelművé, amivel drazsévá való további feldolgozásnál számolunk: a terhelés abban áll, hogy a pankreatin!. először 20 óra hoszszat, 20 °C-os és 58% relativ nedvességtarlalmú levegőn tároljuk, és ezután zárt edényben 24 óra hosszat 50 °C-on melegítjük. 1. Táblázat A technika jelenlegi állása és a találmány szerint előállított pankreatinkészitmények aniiláz- és lipáz-slabilitását hasonlítjuk össze. Az 1., 2. és 3. jelű pankreatinkészítmények különböző gyártó cégek kereskedelmi forgalomban lévő készítményei. Előállítási eljárás Amiláz Kiindulási aktivitás FlP-egység/nig Terhelési veszteség % Lipáz Kiindulási aktivitás FlP-egység/ing Terhelési veszteség % 1. Techn. jelenlegi állása szerinti 43.1 6 40.7 7 2. Techn. jelenlegi állása szerinti 57.2 43 37.0 14 3. Techn. jelenlegi állása szerinti 51.0 41 48.3 31 4. Találmány szerinti 93.6 3 90.3 6 Az 1. táblázat azt mutatja, hogy a hagyományos pankreatinkészitményeknél a terhelési veszteségek az enzimaktivitással erősen nőnek. Meglepő módon azonban a talál- 50 mány szerinti eljárással előállított pankreatinkészítménynek, lényegesen nagyobb enzimaktivitása ellenére, a legkisebb a terhelési vesztesége. 55 Példa 100 kg mélyhűtött sertéshasnyálmirigyet foszlatunk vagy ledarálunk, és 250 1-es üst- 60 ben 100 g kalcium-glükonátot tartalmazó 20 1 vízben 200 g szilikon hab zás gátlóval elkeverünk. A mirigy szabad tripszintartalma szerint legfeljebb 1 kg kész pankreatinnak 5 1 vízzel készült oldatát adjuk az autoiizátum- 65 hoz, mint kezdeti reakciósegító anyagot. Ezt a pankreatint az alább leirt ,37°-hidrolizis próbával" vizsgáljuk meg. Erre a célra a fótömegból 120 g-ot veszünk ki. Ezután keverés közben az elegyhez adunk 15 liter 84%-os izopropanolt és 1,5 kg nátrium-hidrogén-karbonátnak 20 liter vízzel készült oldatát. Egy éjjen át állni hagyjuk, ezalatt a hőmérséklet körülbelül 2 °C-ról 12 °G-ra emelkedik, reggel 20 °C-ra melegítjük és ezen a hőmérsékleten továbbkeverjük. Az autolizis végpontját az ülepedési vizsgálat adja. Az autolizis utolsó szakaszában minden fél-, később minden negyedórában 10 g szuszpenziót veszünk ki az elegyból, a mintát üvegbottal 5,4 ml 84%-os izopropanollal elkeverjük, és egy percig továbbkeverjük. A keletkezett oldatból az üvegbotra ragadt rostokat eltávolítjuk, és az 6
