196435. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pankreatin kinyerésére
11 196435 12 oldatot mágneses keverővei ellátott 50 ml-es főzőpohárban 20 ml 84%-os vizes izopropanolba bekeverjük. Egy perc múlva a keveröt leállítjuk, és az elegyet egy illetve három percen át ülepedni hagyjuk. A próbát pozitívnak, és ezáltal az autolizist befejezettnek értékeljük mihelyt az eleg.vben egy perc múlva 3 mm, illetve három perc múlva 10 mm magasságú (tőbbé-kevésbé tiszta) felső fázis keletkezik. Példaként tipikus ülepedési próbasort mutatunk, ami akkor kezdődik, amikor az autolizátum hőmérséklete eléri a 20 °C-ot. Ülepedési próba Autolízis időtartama 20 °C-on mm/0.5 perc megfelel mm/perc megfelel mni/3 perc 1.00 óra 0 0 0 2.00 óra 0 0 0 2.50 óra 0 0 1 2.75 óra 0 1 4 3.00 óra 1 3 10 3.25 óra 3 6 18 3.50 óra 5 10 20 3.75 óra 9 18 20 4.00 óra 14 20 20 . Ebben a példában tehát az autolízis befejezésének a legkedvezőbb időpontját 3 óra múlva érjük el. Ezáltal az is lehetővé válik, hogy más, ismeretlen (például hosszabb vagy rövidebb ideig tárolt) sertéspankreatin készítményekről összehasonlítható képet kapjunk a ^^-hidrolizispróba" végrehajtásával: A kalcium-glükonátos mirigypépből 120 g-ot kiveszünk, hozzáadjuk 1,5 g nátrium-hidrogén-karbonátnak 25 ml vízzel készült oldatát, és 37 °C-on fél óra hosszat keverjük. Ebből a gyorsautotízátumból hajtjuk végre az ülepedési vizsgálatot. 2 mm/3 perc alatti értéknél 2 millió egység szabad tripszint, a legfeljebb 12 mm/perc értéknél 1 millió egységnyit és a még nagyobb ülepedési sebességnél pedig szabad tripszint már nem adunk a főrészhez (pankreatin formájában). Például 1 millió egység szabad tripszint 4000 egység/g aktivitású 250 g súlyú pankreatin tartalmaz. Ilyen módon a különböző eredetű nyersanyagokat az üzemi gyakorlat számára standardizálhatjuk. Miután a megfelelő időpontot megállapítottuk, az autolizist 72,5 liter 84%-os (visszanyert) izopropanol bekeverésével megállítjuk. Még egy fél óra hosszat keverünk, mire az oldhatatlan rostok mellett tiszta oldat keletkezik, amiből a rostokat kiszűrjük. Ehhez az üsttartalmat 50 literes nyitott üstbe behelyezett körülbelül 5 mm lyukbóségü szitán keresztülengedjük, ami horgonykeveróve! van felszerelve. A szitaúst fenékkifolyója szivattyún keresztül csatlakozik egy 500 literes polipropilén tartályhoz. Ebben a lartályban 313 liter vissz.an.vert 84%-os izopropanol van, és ezt a tartályt lassú keverés közben a szitán átbocsátott szúrt oldattal továbbtöltjűk. A szitaüstben visszamaradó rostokat még 10 percen át szárazra keverjük. A rostok súlya 7-8 kg. Az 500 literes tartályban a pankreatin durvaszemcsés kristályként 1 óra alatt 80 literes térfogatra kiülepszik (20 °C-on; 24 °C-on fél óra alatt). Az anyalúgot dekantáljuk, és desztillációval izopropanolt, nyerünk viszsza belőle. Az üledéket 63 liter visszanyert 84%-os izopropanollal keverjük, és egy éjjen át ülepedni hagyjuk. A következő nap ezt a folyamatot megismételjük, és az igy kapott üledékhez körülbelül 45 liter 84%-os izopropanolt adunk, illetve annyit, amennyi ahhoz keli, hogy a pankreatin szuszpenziót 76%-os izopropanolban állítsuk elő. Ezt a szuszpenziót 40 cm átmérőjű nuccson leszűrjük és jó szá-azra szívatjuk. A szűredéket rövid ideig aprítjuk és tálcákon szétterítjük. A szárítást egy éjjen át végezzük legfeljebb 55 °C hőmérsékleten és 5 mbar-nál kisebb nyomáson. Pankreatin súlya: 11.6 kg Amilázak tivitása: 93.6 FlP-egység/mg L i pázak ti vi tása: Proteázak ti vitása enterokinázzal 90.3 FlP-egység/mg aktiválva: 5.6 FlP-egység/mg aktiválás nélkül: Trip színak tivitása ente rokinézzai 5.6 FlP-egység/mg aktiválva: 4.2 FlP-egvség/mg aktiválás nélkül: Kimotripszinaktivitása enterokinázzal 4.1 FlP-egység/mg aktiválva: 28.3 FlP-egység/mg aktiválás nélkül: 28.3 FlP-egység/mg Szárazanyag tar talma: 98.7% Zsírtartalma: 0.4% Térfogatsúlya: 0.65 g/ml Sűrűsége: 0.76 g/ml Csír&száma: 200 csira/g Az USP XVII szerint nem kívánt csirák a készítményből hiányoznak. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás pankreatin kinyerésére, adott esetben kalciumionokat tartalmazó vizes hasnyálmirigyszövet szuszpenzió aulolízisével, a rostok eltávolításával, adott esetben víztelenítéssel, zsirtalanílássnl, kicsapással és a kapott csapadék szárításával azzal jellemezve, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
