196435. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pankreatin kinyerésére
7 196435 8 és gyorsítjuk; több mint 3% hidrogénkarbonát hozzáadása a pankreatin tárolhatóságát veszélyeztetheti. Kis mennyiségű kalciumsó hozzáadása (például IX alatt) az aulolizis száméra kedvező. A proteázoknak proenzimjeikböl való szabaddá válásával párhuzamosan, az állandóan növekvő mennyiségű szabad proteázok által, először is felgyorsul a kisérő hasnyálmirigy fehérjék emésztódése. Az emésztődés azonban végül átterjedne az érzékeny enzimekre is úgy, hogy különösen az amiláz, de maguk a proteázok is károsodnának. Éppen a proteázok kímélése céljából adunk az elegyhez legfeljebb 20X, előnyösen mintegy 10-15X izopropanolt. Ez az izopropanol mennyiség azonban magában nem elegendő arra, hogy a teljes enzimaktivitás megmaradjon. Ezért fontos a kezdődő enzimkárosodás időpontját kitaláni, és legkedvezőbb az autolizist röviddel ezelőtt az időpont előtt megszakítani. Az autolízisnek eddig az időpontig való tartama, a teljesen azonos külső fetételek ellenére is, akár 600X-kal is ingadozhat, a hasnyálmirigy eredetétől, korától és tárolásától függően úgy, hogy általános idő nem adható meg. A találmány szerint a legkedvezőbb időpontot úgy határozzuk meg, hogy egyszerű gyorsvizsgálattal az autolizátumból kivett próbán, 55-65%-os izopropanolban az optimális ülepedési sebességet megfigyeljük. Ez az ülepedési vizsgálat a kis próbákon gyakorlatilag az autolizátumnak a pankreatin kiválásáig végrehajtott további feldolgozása és az állandóan változó ülepedési viszonyok megfigyelése. Ehhez pédául félóránként - a vége felé 10-15 percenként - mindig 10 g autolizátumszuszpenziót veszünk ki, 5 ml 84%-os izopropanollal elkeverjük, és a keletkezett oldatot keverés közben 20 ml 84%-os izopropanolba öntjük. A kivált csapadék ülepedési sebességét határozzuk meg. Ha 3 perc ülepedési idő után az 50 ml-es főzőpohárban például több mint 3-5 mm tiszta felső réteg figyelhető meg, úgy szabály szerint elértük az optimális ülepedési sebességet, és ezzel a keresett enzimkárosodás előtti időpontot is. A kezdődő enzimkárosodást arról lehet megismerni, hogy az anyalúg (a felső réteg) már nem tiszta (illetve az üledék és az anyalúg között zavaros zóna van). Különböző sarzsok egységesebb autolizálódásának elérésére előnyös egy korábbi nyeredékböl egy kevés pankreatint hozzáadni. Az autolizist -2 °C é3 30 °C közötti, előnyösen 25 °C alatti hőmérsékleten hajtjuk végre, de nem kell állandó hőmérsékletet tartani. Itt egy sor hasznosítási lehetőség adódik, így energiatakarékosság, éjszaka vagy hét végén végrehajtott autolizis, munkaidómegtakaritás. Az autolizis legkedvezőbb végpontját mindig az ülepedési próbából határozzuk meg. Ezután az autolizátum egész mennyiségéhez további izopropanolt adunk, hogy az autolizist. megszakítsuk. A találmány szerinti eljárásnál a víz és alkohol össztómegére vonatkoztatva 30-35% izopropanol tartamú elegy rövid keverésével csaknem tiszta és annyira higan folyós oldat keletkezik az oldhatatlan rostok mellett, hogy a rostok elválasztása nagy méretekben is teljesen problémamentes 4-5 mm lyukhöségü szitaszövetből készült kosár alkalmazáséval, amit a legjobb keverővei ellátni, hogy végül száraz rostmaradékot nyerjünk. A leszűrt oldatot pankreatin kinyerése céljából annyi 80-100%-os izopropanolba folyatjuk, hogy az a 30-35% izopropanol tartalmú eleggyel elkeveredve a csapadék kiválásához szükséges 55-65% izopropanol koncentrációt elérje. Előnyös a vizes oldatból visszanyert, úgynevezett 84%-os izopropanolt használni, ami a 88%-os azeotróp elegyet megközelítve mintegy 84% izopropanol tartalmú. 55% aiatti koncentrációnál a leválás nem töKéletes, ilyenkor tehát kitermelésveszteséggel kell számolni. 65% feletti koncentrációnál valószínűleg a nem kívánt enziminhibitorok is kiválnak, és ezáltal a proteázok aktivitása alacsonyabb lesz. A találmány szerinti eljárással kapott pankreatin annyira durvaszemcsés, hogy egy órán belül az eredeti térfogat 10-20%-ára kiülepszik, és a felső tiszta anyalúgot egyszerűen dekantálhatjuk vagy leszivathatjuk. A leülepedett csapadékot egyszerű módon a visszanyert 84%-os, legvégén friss, vízmentes izopropanollal való felkeverésekkel és az ezeket követő ülepítésekkel mossuk. Bár ezt az ülepítési módszert az 1 328 202 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás mér ismertette, mégsem volt semmi jelentősége, mivel az ülepítés többnyire nem sikerült. Pontosabban, csak a találmány szerinti ülepitési próbával válik ez biztos eljárássá. Ehhez a folyamathoz más szokásos eljárások zárt, védógázzal ellátott centrifugát használnak, ami a terméket melegedés miatt károsítja, a leváláshoz lényegesen hosszabb idő szükséges, és a pankreatin mosása csak friss oldószerben való intenzív aprítással (a helyi túlmelegedés veszélye) és az ezt követő újabb centrifugálással lehetséges, miáltal sok energiára és munkaidőre van szükség. Az elválasztott anyalúgból az izopropanolt desztíliációval visszanyerhetjük. A desztillációs maradék szétválik egy alsó vizes fázisra, ami szappant és triptont tartalmaz oldott állapotban és egy ezen úszó zsírrétegre, ami lehűlés után megdermed. A visszanyert 84%-os izopropanolt a találmány szerinti eljárás bármely folyamatához közvetlenül újra felhasználhatjuk. Az izopropanoltartalomnak 70-85%-ra való beállítása a következőkben leirt szárítási eljárásnál kedvező; izopropanol helyett 80-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
