196378. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 3(2H)piridazinon származékok és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
17 196378 18 gerimalacokat mesterségesen lélegeztetjük kisméretű állatorvosi lélegeztető készülék alkalmazáséval (Shinano cég SN-480-7 típusjelű gyártmánya), a lökettérfogatot 4,5 ml-re, az ütemet 50/percre állítva. A tüdórezisztencia változását a Nihon Kohden cég TP-602T típusjelű nyomásadójával mérjük, amelyet a légcsőkanülhöz T-csővel illesztünk. A légáram térfogat növekedését a maximális broncho-konstrikció százalékában fejezzük ki, amely akkor lép fel, amikor a légcsövet elszoritjuk. Sebészeti előkészítés után az állatokat előkezeljük, ami abban áll, hogy a [0,1 vagy 10 mg/kg adaggal végzett] EA-próbát 10 perccel megelőzően 0,2 mg/kg-nyi indometacinumot, 6 perccel megelőzően 2 mg/kg-nyi pirilamint és 5 perccel megelőzően 0,1 mg/kg propranololt adunk be. A vizsgálandó hatóanyagmintákat az EA-próba elvégzése előtt adjuk be intravénásán vagy orálisan. A broncho-konstrikció gátlást (Inh) százalékosan határozzuk meg a kővetkező képlet szerint: 1,0 - max. konstrikció /%/ hatóanyag jelenlétében Inh /%/ = --------------------------------- X 100 max. konstrikció /%/ hatóanyag hiánya esetén A maximális broncho-konstrikció az EA-próba elvégzése után 30 perccel lép fel. A teszt során intravénásán négy állatnak, orálisan hat állatnak adjuk be a hatóanyagmintákat. a) az intravénás teszt: A 2 mg/kg-nyi hatóanyagmintát 3%-os Tween 80 szerben szuszpendáljuk vagy feloldjuk és az intravénás beadást 1 perccel előbb végezzük, mint a 10 mg/kg adagos EA-próbát. A hatóanyag nélkül végzett ellenőrző próbánál kapott konstrikciós reakció 73 í 9% (átlag t szórás, n=4) értéket adott, amellyel szemben az ismert szer (FPL-55712) 27%-os gátló hatást fejtett ki. A vizsgált hatóanyagmintákkal kapott gátló hatást (Inh) az 5-1. táblázat mutatja. 5-1. táblázat Vegyület száma Inh /%/ 3 31 12 31 13 19 25 27 FPL-55712 27 b) az orális teszt: A hatóanyagmintákat 5X-os arabmézga oldatban szuszpendáljuk, majd az orális beadást - az 5-2. táblázatban megadott adagolással - két órával előbb végezzük, mint a 0,2 mg/kg adagos EA-próbát. A hatóanyag nélküli ellenőrző tesztnél a reakció értéke: 62 t 6%. Az ellenőrző ismert szer, az FPL-55712 100 mg/kg-nyi adagjának orális beadásakor számottevő inhibiciót nem tapasztaltunk, a vizsgált - /I/ általános képletü - hatóanyagmintákkal kapott gátló hatást az 5-2. táblázat mutatja. 5-2. táblázat Vegyület Adag Inh /%/ száma [mg/kg] 30 50 65 32 50 71 36 50 68 38 30 53 38 50 62 B. A toxicitás vizsgálata B/l teszt. A halálos dózist ddY tőrzsbeli négyhetes hím egereknél határozzuk meg hét nappal a hatóanyagminták intraperitoneális beadása után. Az eredményeket a 6. táblázat mutatja. 6. táblázat Vegyület Adag Halálos dózis száma [mg/kg] halálesetek száma kísérletek száma 3 200 0/2 400 0/1 12 200 0/2 400 0/1 13 200 0/2 400 0/1 B/2. teszt. A halálos dózist ddY törzsbeli négyhetes hím egereknél határozzuk meg hét nappal a hatóanyagminták orális beadása után. Az eredményeket a 7. táblázat mutatja. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
