196263. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eljárás és készítmény
1 196 263 2 és más specifikusan megköthető anyagok kimutatására. Ezek a módszerek általában hosszabb időt is vesznek igénybe, mint az agglutinációs tesztek. Emellett a radioaktív vagy nehézfém-elemek alkalmazásával járó vizsgálati módszerek további hátránya, hogy különleges biztonsági és hulladékelhelyezési intézkedéseket is igényelnek. Nyilvánvaló tehát, hogy szükség van olyan gyors, biztonságos és széleskörűen alkalmazható vizsgálati módszerekre, amelyekkel az eddigi módszerekhez képest lényegesen kevesebb vizsgálattal lehet a fertőzések vagy betegségek okozóit azonosítani és amelyekhez kisebb térfogatú biológiai anyagot kell venni a vizsgálandó személytől a vizsgálat céljaira. Ezt a szükségletet elégíti ki a jelen találmány szerinti diagnosztikai eljárás és készítmény. A találmány tárgyát elsősorban olyan agglutinációs eljárás képezi valamely ligandumnak vagy ligandumok egy csoportjának a kimutatására, amelyben a közeget egy két vagy több oldhatatlan színes anyagot tartalmazó reagenssel kerveijük össze, amelyek mindegyike képes megkülönböztethetően színezett agglutinátumokat képezni valamely specifikus ligandum vagy ligandumok egy specifikus csoportja jelenlétében, és így az a körülmény, hogy az illető megkülönöztetheíően színezett agglutinátum képződik-e vagy sem, egyértelműen mutatja az illető ligandum jelenlétét vagy hiányát a vizsgált közegben. A „megkülönböztethetően színezett” kifejezés azt jelenti, hogy a valamely meghatározott ligandum vagy ligandum-csoport jelenlétében képződött agglutinátum színe eltér az egyéb ligandumok vagy ligandum-csoportok jelenlétében képződő bármely agglutinátum színétől és megkülönböztethető a háttér-színtől vagyis a bármiféle agglutinálatlan részecskék színétől is. Az agglutinátum megkülönböztethető színe onnan ered, hogy mindegyik oldhatatlan anyag színe eltér a jelenlévő többi oldhatatlan anyagok színétől. Előnyös, ha a szóbanforgó agglutinátum szabad szemmel is látható. A találmány szerinti agglutinációs teszt kivitelezése valamely olyan alkalmas oldószerben történik, amelyben a színes anyagok nem oldódnak; előnyösen vizes oldószert alkalmazunk erre a célra. A „ligandum” fogalmának köre — amint ezt a fogalmat a jelen találmány leírásában alkalmazzuk, magában foglalja az antigéneket, hapténeket, monoklonális és poliklonális antitesteket, valamint egyéb olyan anyagokat is, amelyek képesek megkötni valamely specifikus kötőképes anyagon. Ilyen egyéb anyagok körébe például az avidin, a biotin, a lektinek, a lektinekhez specifikusan kötődni képes szénhidrátok, az A-fehérjc és az IgG FC fragmentuma tartoznak. A találmány szerinti eljárásban a közeg valamilyen bológiai minta, például az emberből, állatból vagy egyéb forrásból vett testnedv, vagy bármely más olyan folyadék lehet, amelyben valamilyen ligandum található. Ilyen közegek például kultúrák folyékony tápközegei, valamely szilárd vagy folyékony kultúrából készített szuszpenziók, szövetkultúrák szupernatáns folyadéka, baktériumokból vagy vírusokból kémiai úton vagy enzimekkel extrahált anyagok (példul a sztreptokokkuszokből szerológiai célokra készített Lancefieldextraktumok), valamint élelmiszerek vagy környezet-minták (például a közfogyasztásra szolgáló vízvezeték-rendszerből vett vízminták) lehetnek. Az állatoktól (vagy embertől) vehető biológiai minták példáiként a cerebrospináüs folyadék, vér, vizelet, köpet, szövetkivonatok, izzadság, könynyek, váladékok, ürülék, nyál és ízületi nedv említhetők. Ez a felsorolás azonban nem tekinthető kimerítőnek: a szakmabeli számára nyilvánvaló, hogy a jelen találmány szerinti vizsgálati módszer céljaira más típusú biológiai minták is vehetők és vizsgálhatók. Az oldhatatlan színes anyagot abból a célból alkalmazzuk, hogy az megkülönböztethetően színezett agglutinátumot képezzen valamely specifikus ligandum vagy ligandumok valamely csoportja jelenlétében, azáltal, hogy valamely olyan specifikus megkötóanyagot vagy iiyen anyagok csoportját tartalmazza vagy olyan specifikus megkötóanyaghoz legyen kötve, amely képes a kimutatandó ligandum vagy ligandum-csoport megkötésére. Ez a specifikus megkötóanyag lehet a ligandum immunológiai megfelelője; így ha a ligandum antitest, akkor a specifikus megkötőanyag ennek az antitestnek az antigénje lehet és fordítva lehet azonban olyan anyag is, mint az avidin, biotin, valamely lektin, valamely lektinhez specifikusan kötődni képes szénhidrát, A-protein vagy az IgG FC-fragmentuma. Az oldhatatlan színes anyag előnyösen mikroszkópikus méretű részecskékből áll. Az eljárás céljaira alkalmas, színes vagy színező részecskékből álló anyagok példáiként nem életképes baktériumsejtek, alginát-részecskék, szefaróz-gyöngyök, szilícium-dioxid, alumínium-oxid, eritrociták, polimer latexek, mintpolisztirol-latex, sztirolglicidil-latexck és egyéb polimer latexek, mint például a 4419453 sz. amerikai egyesült államokbeli leírásban leírt ilyen termékek említhetők. A színes részecskék előállítása vagy színezése ismert módszerekkel, például a 4 419 453 sz. amerikai egyesült államokbeli vagy a 3000483 sz. NSZK-beli közrebocsátási iratban leírt módszerekkel történhet, de ilyen anyagok készen is beszerezhetők. A színek közül a vörös, sárga, kék, zöld, fekete, cián-kék, bíborvörös és fehér a legalkalmasabbak. A specifikus megkötőanyag adszorpció, kémiai kapcsolat, a részecskébe való bekebelezés útján vagy bármely más, a szakmában ismeretes módon jötódhet a részecskéhez. A megkötőanyagnak a részecske felületén való adszorpciója vagy a részecske megkötöanyaggai történő bevonása célszerűen a részecskéknek megkötőanyag megfelelően pufferezett oldatában való inkubálása útján történhet. Kémiai kapcsolás például a 4436826 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett módszerrel történhet, amely szerint egy karbodiimidet alkalmaznak kapcsolószerként. Hasonló kapcsolási módszert ismertet a 4140662 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás is. A jelen találmány különösen jól alkalmazható baktériumos, vírusos vagy parazitás fertőzések kimutatására és antigéneknek vagy antitesteknek 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
