196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196229 2 A dimetil-szulfoxid/cc. sósav aránya általában 8:2—9,5:0,5. Tömény sósavként kitüntetetten a 37%-os (tömeg/tömeg) sósavat alkalmazzuk. A reakció terméke általában az N-acilaminoglukuronil-aglikon és az ágiikon elegye. A hőmérséklet ellenőrzésével és egyes esetekben a sav koncentrációja és erőssége beállításával az eljárást — legalábbis bizonyos mértékben — úgy irányíthatjuk, hogy a két főtermék — azaz az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikonok és az A 40926 antibiotikum ágiikon — közül valamelyikhez jussunk. Közelebbről: viszonylag alacsony hőmérséklet fenntartásával, a sav-keverék töménységének lehetséges csökkentésével és a reakcióidő megfelelő ellenőrzésével az N-acilaminoglukuronil-aglikonok kitermelése növelhető, míg aránylag magasabb hőmérsékleteken és hosszabb idők alatt egyedül az aglikont kapjuk. A reakció lefolyását ebben az esetben is TLC-vel vagy előnyösen HPLC-vel követjük és a reakciót leállíthatjuk, amint a keresett anyag optimális termelését elértük, annak érdekében, hogy a további kinyerési eljárás kitermelését a maximálisra növeljük. Ha olyan terméket kapunk, amely az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikonok és az A 40926 antibiotikum ágiikon keveréke, ez kromatográfiával (így folyadék-folyadék kromatográfiával, gyorskromatográfiával, HPLC-vel = nagynyomású folyadékkromatográfiával és affinitáskromatográfiával) választható szét. Ha affinitáskromatográfiát alkalmazunk, egy kitüntetett adszorbens az immobilizált D-alanil-D-alanin, amelyet a 122969 sz. európai szabadalmi leírás (közzétéve 1984. október 31-én) ismertet. Különösen kitüntetett az agaróz-epszilon-aminokaproil-D-alanil-D-alanin. Az eluáló elegy vizes pufferből és egy sóoldatból áll. A pH és a sókoncentráció beállítása hatására az A 4Q926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikottjai elkülönülnek az A 40926 antibiotikum aglikontól. A találmány további tárgya és előnyös kiviteli módja eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon AB komplex vagy ennek egyik faktora túlnyomó mennyiségben való előállítására, amely abból áll, jtogy az A 40926 antibiotikum komplexet vagy ennek egyik faktorát (azaz az A 40926 antibiotikum AB komplexet, az A 40926 antibiotikum A faktort, az A 40926 antibiotikum B-faktort, az A 40926 antibiotikum B0 faktort, az A 40926 antibiotikum Bi faktort, az A 40926 antibiotikum PA faktort vagy az A 40926 antibiotikum PB faktort) ellenőrzött savas hidrolízisnek vetjük alá egy poláris aprotikus oldószer és egy erős ásványi vagy szerves sav keverékével, korlátozott (0,1—10 tömeg/tömeg%) mennyiségű víz jelenlétében, a szobahőmérséklet és 100 °C (előnyösen 40 °C és 65 °C) közötti hőmérsékleten, 3—120 órán át. Legelőnyösebben a hidrolizáló elegy dimetilszulfoxid és 37%-os sósav 9:1—9,5:0,5 arányú elegye, a hőmérséklet 65 °C és a reakcióidő 5 óra. Ha az N-acilaminoglukuronil-aglikonok előállításához kiindulási anyagként az A 40926 antibiotikum komplexet alkalmazzuk, olyan végterméket kapunk, amely lényegében az eredeti komplex faktorainak megfelelő keverék, míg ha egyetlen faktort — pl. az A 40926 antibiotikum A faktort vagy B faktort — alkalmazunk, egyetlen N-acilaminoglukuronil-aglikon faktort kapunk, amely az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon A faktorral, illetőleg az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon B, Bo vagy Bi faktorral azonos. Ha az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon AB komplexet kapjuk, ez ismert módon — pl. folyadék-folyadék kromatográfiával vagy előnyösen preparativ HPLC-vel — választható szét az egyes faktorokra. Egy kitüntetett eljárás szerint fordított fázisú folyadék-kromatográfiát végzünk, előnyösen saválló acél oszlopokon, mérsékelt nyomáson (5—50 bar), vagy nagy nyomáson (100—200 bar). A szilárd fázis lehet egy szilanizált szilikagél, 2—18 (legelőnyösebben 18) szénatommal vagy fenilcsoporttal a szénhidrogén fázist ^n; az eluálószer egy poláris, vízzel elegyedő (az előzőkben meghatározott) oldószer és egy, a gyantával kompatíbilis pH-jú (előnyösen pH 4—8) vizes puffer elegye. Legelőnyösebben lineáris grádiens elúciót végzünk egy poláris vízoldható aprotikus oldószer — pl. acetonitril — és egy pH 4—8, előnyösen pH kb. 6 vizes puffer oldat elegyével. így 5%—45% közötti lineáris grádienst képezhetünk acetonitril: pH 6 foszfát puffer 70:30 arányú elegyével és acetonitril: pH 6 foszfát puffer 10:90 arányú elegyével. A találmány egy további tárgya és kitüntetett foganatosítási módja eljárás az A 40926 antibiotikum ágiikon szelektív előállítására, amely abból áll, hogy az A 40926 antibiotikum komplexet vagy ennek egyik faktorát — azaz az A 40926 antibiotikum AB komplexet, az A 40926 antibiotikum A faktort, az A 40926 antibiotikum B faktort, az A 40926 antibiotikum PA faktort, az A 40926 antibiotikum PB faktort, az A 40926 antibiotikum Bo faktort vagy az A 40926 antibiotikum Bt faktort —, az A 40926 antibiotikum mannozil-aglikont vagy az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikont (az AB komplexet vagy ennek valamelyik faktorát) ellenőrzött savas hidrolízisnek vetjük alá (a) egy szerves protikus oldószer jelenlétében, amelyet a következők közül választunk ki: a reakció hőmérsékletén cseppfolyós alifás savak és alfahalogénézett alifás savak; a reakció hőmérsékletén vízzel enyhén elegyedő folyékony alifás és cikloalifás alkanolok; a reakció hőmérsékletén vízzel enyhén elegyedő folyékony fenil-helyettesített rövidszénláncú alkanolok, ahol a fenil-csoport adott esetben 1—4 szénatomos alkil-, 1—4 szénatomos alkoxi-csoportokat vagy halogénatomokat tartalmazhat helyettesítőkként; és a reakció hőmérsékletén folyékony beta-polihalogénezett rövidszénláncú alkanolok; vagy (b) egy erős sav jelenlétében, amely kompatíbilis az oldószerrel (ez lehet egy erős ásványi sav, erős szerves sav vagy hidrogén alakban egy erős savas kationcserélő gyanta) és (c) kb. 20 °C és kb. 100 °C közötti reakció-hőmérsékleten. Ha protikus oldószerként alifás savat vagy alfahalogénezett alifás savat alkalmazunk, előnyben részesítjük az 1—5 szénatomos alifás savakat és a 2—5 szénatomos alfa-halogénezett alifás savakat, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6C 65 7
