196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196229 2 nyitva 1,22. A továbbiakban eluált másik vegyület retenciós ideje ebben a HPLC rendszerben 1,27; ezt A 40926 antibiotikum B, faktornak nevezzük. Ez a vegyület az előbbi módszerrel különíthető el (kitermelés 15 mg). 7. eljárás Az A 40926 antibiotikum PA faktor, illetőleg az A 40926 antibiotikum PB faktor átalakítása A 40926 antibiotikum A faktorrá, illetőleg B faktorrá 50—50 mg A 40926 antibiotikum PA faktort, illetőleg A 40926 antibiotikum PB faktort külőn-külön feloldunk 2,5 ml vizes 1 tömeg/térf.%-os ammóniumhidroxidban és a kapott oldatokat kevertetés közben kb. 24 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A vizet n-butanollal végzett azeotróp desztillációval eltávolítva, etiléteres kicsapást végezve és a csapadékot szűréssel összegyűjtve az eredetileg A 40926 antibiotikum PA faktort tartalmazó oldatból A 40926 antibiotikum A faktort, az eredetileg A 40926 antibiotikum PB faktort tartalmazó oldatból pedig A 40926 antibiotikum B faktort kapunk (kitermelés kb. 75%). 8. eljárás A D-ala-D-ala-Sepharose előállítása a) A Sepharose aktiválása epiklórhidrinnel. 1 liter Sepharose 4B-t (Pharmacia Fine Chemicals) porózus üvegszűrőn szűrünk, ionmentesített vízzel mosunk, majd enyhe kevertetés közben szobahőmérsékleten hozzáadjuk 1,2 liter IN NaOH oldathoz. 100 ml epiklórhidrin hozzáadása után az anyagot kb. 20 °C-on hideg vízzel végzett külső hűtés mellett 24 órán át folyamatosan kevertetjük. A szuszpenziót szűrjük és a szilárd anyagot kb. 5 liter ionjnentesített vízzel, semleges pH eléréséig, mossuk. b) A Sepharose-epszilon-ACA-D-AIa-D-Ala előállítása. 17 g (62,2 mmól) epszilon-ACA-D-Ala-D-Ala-t 200 ml vízben oldunk, az oldat pH-ját 20%-os NaOH-dal 11-re állítjuk be és hozzáadunk kb. 500 ml epiklórhidronnel kezelt Sepharose 4B oldatot (összes epoxid-tartalom kb. 15,5 m-egyenérték), mechanikai kevertetés mellett. A szuszpenziót pH 11 -en és szobahőmérsékleten kb. 2 napon át kevertetjük (amig az epoxid-tartalom mérésére szolgáló próba negatív eredményt nem ad), szűrjük és a gyantát 300 ml vízzel mossuk. A szűrt gyantát ismét vízzel mossuk (kb. 3 liter), semleges pH eléréséig. 460 ml Sepharose-epszilon-ACA-D-Ala-D-Ala-t kapunk. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás (I) általános képletű antibiotikum, a képletben A jelentése hidrogénatom vagy —N-(l 1—12 szénatomos)-acilaminoglukuronil-csoport és B jelentése hidrogénatom, nevezetesen az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon AB komplex, az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon A faktor, az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon Bo faktor, az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon B, faktor, az A 40926 antibiotikum-aglikon, amely a következő tulajdonságokkal jellemezhető: A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronilaglikon AB komplex (a nem-addíciós só alakban): A) UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokkal: Iambdamax (nm) a) 0,1N HC1 282 b) pH 7,4 foszfát puffer 282; 310 (váll) c) 0,1N KOH 302 B) IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokkal (cm-1); 3700—3100; 3000—2800 (nujol); 1650; 1620— 1550; 1500; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1300; 1250—1180; 1150; 1060; 1010; 970; 930; 840; 820 C) az ‘H—NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-en, DMSO—dfi-ban (hexadeutero-dimctilszulfoxid) felvéve, CF.iCOOH hozzáadása mellett, belső standardként (0,00 ppm) TMS-l alkalmazva (delta, ppm): 0,84, d és t (izopropil-CHi-ek és terminális CHi); 1,14, m [(CH2),,]; 1,44, m (—CH2—C—CO és izopropil—CH); 2,00, t (—CH2—CO); 2,5, s (DMSOdj); 2,5, s (N—CH3); 2,93, m [CH, (22)]; 3.33, m [CH, (Z’2)j; 3,20—3,80, m (cukor CH-k); 5.34, d (az acilaminoglukuronsav anomer protonja); 4,10, m (X6); 4,33, d (X5); 4,43, d (X7); 4,9, m (X2); 5,1 (4F és Z6); 5,4, s (XI); 5,58, d (X4); 5,7, s (4B); 6,06, d (X3); 7,73, s (6B); 6,26—8,42, s és m (aromás CH-k és peptid—NH-k); 8,70—10,5, széles váll (fenolos OH-k és NH2) d = duplett m = multiplett s = szingulett t = triplett D) retenciós idő (R,) 1,20 és 1,30 a teikoplanin A2 2 komponenshez viszonyítva (Rt = 20,3 perc) az elemzést fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végezve: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) duálószerek: A eluálószer: CHjCN 10% NaH2P0rH20 (2,5 g/1) pH 6,0-ra beállítva 90% B eluálószer: CH3CN 70% NaH2P04-H20 (2,5 g/1) pH 6,0-ra beállítva 30% eluálás: lineáris grádiens (5%—60% B eluálószer A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,8 ml/perc UV detektor: 254 nm belső standard: teikoplanin A2 2 komponens (Gruppo Lepetít S. p. A.) E) sóképzésre kénes sav-csoportok F) sóképzésre képes amino-csoportok G) a maghoz nem kapcsolódik mannóz-egység. A 40926 antibiotikum N-aci/aminog/ukuronil-aglikon A faktor (a nem-addíciós só alakban): A) UV abszorpciós spektrum a következő ab-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 22
