196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196229 2 legintenzívebb csúcs 1776 nál. Az FAB—MS elemzés műveleti körülményei a következők: berendezés: VG Mod ZAB, FAB ágyúval (Ion Tech) ellátva körülmények: pozitív FAB, Xe gyorsító feszültség 8 kV mátrix: tioglicerin:glicerin 1:1 (térf./ térf.). Az A 40926 antibiotikum mannozil-aglikon a következő tulajdonságokkal rendelkezik: A) a 24. ábra szerinti UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdaTM* (nm) a) 0,1N HC1 280 b) pH 7,38 foszfát puffer 280; 300 (váll) c) 0,1N káliumhidroxid 298 d) pH 9,0 foszfát puffer 282; 300 (váll) B) a 25. ábra szerinti IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1): 3700-3100: 3000—2800 (nujol); 1655; 1620— 1540; 1505; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1350— 1250; 1210; 1150; 1020; 970; 850; 810 C) a 26. ábra szerinti ‘H—NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat (ppm-ben) mutatja 270 MHz-en, DM50—d* (hexadeutero-dimetilszulfoxid) és CF3COOH elegyében felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva (delta, ppm): 2,51 (s, DMSOdí); 2,50 (s, NCH3); 2,88 (m, Z2); 3,30 (m, Z’2); 4,08 (m, X6); 4,44 (d, X5); 4,49 (d, X7); 4,83 (m, X2); 5,02 (s, 4F); 5,08 (s, Z6); 5,31 (s, a mannóz anomer protonja); 5,53 (d, X4); 5,78 (s, 4B); 6,08 (d, X3); 7,70 (s, 6B); 6,44—8,52 (aromás és peptid NH-k) D) retenciós idő (Rt) 1,18 az L 17054 (TA3—1) antibiotikumhoz (Rt = 8,78 perc) viszonyítva, az elemzést fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végezve: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pra/Altex/Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluáiószer iCHíCN 10% NaH2P04-H20(2,5g/l) 90% pH 6,0-ra beállitva B eluáiószer:CH3CN 70% NaH2P04 • HaO (2,5 g/1) 30% pH 6,0-ra beállítva eluálás: lineáris grádiens (5%—60% B eluáiószer A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,6 ml/perc UV detektor: 254 nm belső standard: L 17054 (TA3—1) antibiotikum (Gruppo Lepetit S. p. A.) E) Rf érték 0,39 a következő kromatográfiás rendszerben: 5 g/1 NaH2P04-H20-t tartalmazó 1M NaCl 70 aceíonitril 30 pH 6,0 -ra beállítva, 60 F2m Merck lemezeket (szilanizált szilikagél, rétegvastagság 0,25 mm) használva Kimutatás: — UV fény — sárga szin Pauly reagenssel — azaz diazotált szulfanilsavvai (.7. Chromatogr. 20, 171, 1965; Z. Physiol. Chem. 292, 99, 1953) — bioautográfia B. subtilis ATCC 6633-mal minimális Davis-f. táptalajon F) a gyors atom bombázásos (FAB) tömegspektrumban M + Hf kb. 1374-nél található. Az A 40926 antibiotikum B faktor N-acilaminoglukuronil-aglikon fizikokémiai jellemzői A) Dinátrium-só C 52,11%; H 5,33%; N 6,31%; Cl (összes) 4,0%; Na2SC>4 hamu 8%; tömegveszteség 140 °C-on: 9% B) Nátrium-só C 52,90%; H 5,44%; N 6,41%; Cl (összes) 4,05%; Na2S04 hamu 4,06%; tömegveszteség 140 °C-on: 8,9% C) Hidroklorid C 52,63%; H 5,44%; N 6,37%; Cl (összes) 6,05%; tömegveszteség 140 °C-on: 8,5% Az A 40926 antibiotikum A faktor N-acilaminoglukuronil-aglikon fizikokémiai jellemzői A) Dinátrium-só C 51,74%; H 5,27%; N 6,35%; Cl (összes) 4,02%; Na2S04 hamu 8,08%; tömegveszteség 140 °C-on: 9,3% B) Nátrium-só C 52,77%; H 5,34%; N 6,48%; Cl (összes) 4,01%; Na2S04 hamu 4,09%; tömegveszteség 140 °C-on: 8,7% C) Hidroklorid C 52,47%; H 5,41 %; N 6,44%; Cl (összes) 6,11 %; tömegveszteség 140 °C-on: 8,5% Az A 40926 antibiotikum ágiikon fizikokémiai jellemzői A) Nátrium-só C 53,19%; H 4,30%; N 7,36%; Cl (összes) 5,32%; Na2S04 hamu 5,35%; tömegveszteség 140 °C-on: 7,3% B) Hidroklorid C 51,86%; H 4,50%; N 7,17%; Cl (összes) 7,78%; tömegveszteség 140 °C-on: 8,8% Az addíciós sóknál a tömegveszteséget nitrogén atmoszférában 140 °C-on való szárítás után, míg a hamutartalmat az USP XXII módszer szerint mértük. A találmány további szemléltetésére a következő példákat mutatjuk be, amelyek önmagukban nem tekinthetők korlátozó jellegűnek a találmány oltalmi köre vonatkozásában. 7. példa Az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon AB komplex és az A 40926 antibiotikum ágiikon előállítása a) 750 mg A 40926 antibiotikum AB komplexet (amelyet lényegében a 3. eljárás szerint állítottunk elő) feloldunk 150 ml 9:1 (térf./térf.) dimetil-szulfoxid:37 (tömeg/tömeg)%-os sósav (DMSO: HC1) elegyben és a reakcióelegyet kb. 65 °C-ra melegítjük fel. A reakció lefolyását HPLC-vel követjük, és miután a kiindulási anyagok teljes mértékben reagáltak egymással (kb. 5 óra elteltével), a reakciót hideg víz (600 ml) hozzáadásával leállítjuk és a kapott elegy pH-ját kb. 7,5-re állítjuk be. Ez az anyag a cím szerinti vegyületek keverékét tartalmazza, amelyet affinitáskromatográfiával, a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 18
