196227. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklikus, vazopresszin antagonista peptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
196227 A dysmenorrhea kezelése a találmány szerinti vegyületek egy másik alkalmazási lehetősége, amennyiben ezeket intravénásán vagy intarnazálisan adagoljuk. A találmány szerinti vegyületek tehát ödéma ke- 5 zelésére vagy vizhajtásra alkalmazhatók. A kezelést a vegyületek parenterális vagy befúvásos adagolásával végezhetjük, amikor is a kiválasztott vegyület nem toxikus, de hatékony mennyiségét előnyösen egy gyógyászati hordozóanyaggal alko- 10 tott készítmény formájában alkalmazzuk. A hatóanyag dózisegysége 0,01—10 mg/kg, előnyösen 0,01—5 mg/kg lehet 70 kg-os beteg esetén. A dózisegységek bevitelét naponta 1—5 alkalommal megismételhetjük. 15 A vazopresszin antagonizmust okozó gyógyászati készítmény hatóanyagként egy (I) általános képletű vegyületet tartalmaz a fentiekben leírt dózisegység formájában, egy standard folyékony hordozóanyagban oldva vagy szuszpendálva. A 20 standard hordozó izotóniás sóoldat, melyet olyan ampullába vagy egy többszörös dózist tartalmazó üvegcsébe helyezünk, melyek alkalmasak parenterális, intravénás, szubkután vagy intramuszkuláris injekció beadására. A belélegzésre alkalmas készít- 25 mény hasonló, de általában egy adagolóval ellátott készüléket vagy inhalátort alkalmazunk. Porított porkészítmények szintén használhatók, akárcsak az olajos készítmények, gélek, izotóniás készítményekhez való pufferek, emulziók vagy aeroszolok 30 standard készítmény formájában. A találmány szerinti vegyületekről bebizonyították, hogy különleges, egyedi antagonista aktivitással rendelkeznek a természetes antidiuretikus hormonnal szemben (anti-ADH aktivitás), in vitro a 35 sertés medulláris szövetében vagy az emberi vesében, és in vivo a hidropéniás patkányban vagy a hidropéniás majomban. Az in vitro vizsgálatok részleteit F. L. Stassen és munkatársai ismertetik [J. of Pharm. Exp. Ther. 233, 50—54 (1982)], de a 40 receptor helyek cikláz aktivitása és kötőpotenciáljának számítását az alábbiakban ismertetjük: Az adenilát cikláz aktivitás vizsgálata 45 Minden kísérletben a medulláris membrán távollétében képződött 32P/cAMP mennyiségét határoztuk meg. Ezt az értéket minden kísérleti adatból leszámítottuk. A vegyületeknek az alap adenilát cikláz aktivitásra és/vagy vazopresszin stimulálta aktivitására való hatását vizsgáltuk. Minden kísérletet háromszor végeztünk el. A Ka értéket Lineweaver-Burke görbe alapján kaptuk. Rel. Vmax = (Vmax vegyület/VmaA vazopresszin) x 100. K = I/[/Ka' (Ka-1)], ahol I jelentése az antagonista koncentrációja, míg Ka' és Ka az antagonista jelenlétében illetve távollétében a vazopresszin olyan koncentrációja, amely az adenilát cikláz maximális aktivitásának felének eléréséhez elegendő. A kötési potenciál vizsgálata Minden kísérletben háromszor mértük meg a kötött 3H-vazopresszin mennyiségét vazopresszin feleslegének (7,5xl0~6M) jelenlétében és távollétében. Ezek az értékek a teljes illetve a nem specifikus kötést jelentik. A vegyület Kb értékét a kompetitiv gátlás egyenletéből számítjuk ki: Kb = IC»/ (1 + L/Kd), ahol ICW jelentése a specifikus 3H-vazopresszin kötés 50%-os gátlásához szükséges koncentráció, L a ligandum koncentrációja, KD a 3H vazopresszin disszociációs állandója (Ko = 3,6 x lO-’M ; lSD = 0,4x lö-1* M). Ezt az átlagos KD értéket három sertésvese membrán készítményen határoztuk meg. Hidropéniás patkány vizsgálata Hím patkányokból a vizsgálat előtt körülbelül 18 órával az ételt és a vizet kihajtottuk. Az állatokat négyesével helyeztük el a metabolizmus vizsgálatokhoz szükséges ketrecekben. 0 órakor a vizsgált anyagot intraperitoneálisan adagoltuk a vizsgálandó csoportnak, míg a két kontroll csoportnak (megkötözött és szabadon mozgó) a hordozóanyag ekvivalens mennyiségét adtunk. A vizsgálati eredmények a kiválasztott vizelet ml-jei (kumulatív), a kiválasztott mEq/patkány elektrolit, kiválasztott vizelet mg/patkány, és az ozmolalitás milli-Osmól/kg víz dimenziójúak. A szignifikanciát tűrési teszttel vizsgáltuk. Az EDsoo a 300 m-Osmól/kg vizelet ozmolalitás eléréséhez (lecsökkentéséhez) szükséges vegyületdózist [pg/kg] jelenti. Az ED500 az 500 milli-Osmól/kg vizelet ozmola-I. táblázat (IV) általános képletű vegyület (n jelentése 1) anti-ADH aktivitás X Y A in vivo (patkány) ED300 [pg/kg]* in vitro (sertés) Ki Kb (nM) [pmól] 1. D-Tyr Gly-NH2 Val 32 30 0,082 2. D-Tyr nh2 Val 63 27 0,065 3. D-Tyr OH Val 156 160 0,35 4. D-Tyr(Et) Gly-NH2 Val 9.9 5,9 0,011 5. D-Tyr(Et) NH2 Val 5,8 3,0 0,0078 6. D- Tyr(Et) nh2 Abu 13 7,6 0,018 * A peptid becsült dózisát ip stat [pg/kg] kaptuk, s ez az U03m-ot a hidropéniás szintről 300 milli-Osmól/kg vízszintre csökkenti. 5
