196227. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklikus, vazopresszin antagonista peptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196227 2 arginin-9-dezglicin]-vazopresszin, az [1-03-merkapto-/?,/í-ciklopentametilén-propionsav)-2-D-tirozin-4-valin-8-arginin-9-dez-glicin-amid]-vazopresszin, és különösen az [ 1 -(/?-merkapto-/?,/?-ciklopentametilén-propÍonsav)-2-(0-etil-D-tiíozin)-4- -valin-8-arginin-9-dez-glicin]-vazopresszin. A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületeket egy lineáris oktapeptidnek a 6-os helyzetben lévő cisztein (Cys) egységében és az 1-es helyzetben lévő 3-merkapto-3,3-cikIoaIkilén-propionsav (Cap) egységben levő két merkapto-csoport segítségével való ciklizációval állítjuk elő. A ciklizációs reakció azonnal lejátszódik egy enyhe, a merkaptánnak diszulfiddá való oxidálására képes oxidáló ágens jelenlétében. A találmány szerinti reakció során a (II) általános képletű vegyületből képződik a (III) általános képletű vegyület, mely képletben X, P, A és Y jelentése az (I) általános képletben megadott, Z jelentése vagy az (I) általános képletben megadott vagy egyszeres kémiai kötést jelent, ha Y jelentése OH csoport, W jelentése az (I) általános képletben megadott vagy OH, ha a fenti képletből Z és Y hiányzik, Qi és Q2 jelentése külön-külön hidrogénatom vagy védőcsoport. A találmány szerinti (II) általános képletű intermedierek újak. A (III) általános képletű vegytiletek, melyek képletében W és Z közül az egyik vagy mindkettő hiányzik, szintén új intermedierek. Az utóbbiak az oktapeptidekénél kisebb VSP antagonista aktivitással rendelkeznek. A ciklizációt oxidációval hajtjuk végre. Bármely, az irodalomban ismert, egy dimerkaptánt diszulfiddá oxidálni képes oxidálószer alkalmas a reakció végrehajtására. Példaként az ilyen oxidálószerekre az alkálifém-ferricianidokat, különösen a kálium- vagy nátrium-ferricianidot, oxigéngázt, dijódmetánt vagy jódot említhetjük. A reakciót úgy hajthatjuk végre, hogy például kálium-ferricianidot adunk a (II) általános képletű,, megfelelő inert oldószerben, például vízben vagy vizes metanolban oldott dimerkaptánhoz 0—40 °C hőmérsékleten. Az oxidációt pH= 7—7,5-en, szobahőmérsékleten híg oldatban végezve jó kitermelést, a ciklikus vegyület elméleti kitermelésére számított 40—50 %-os kitermelést kapunk. A (III) általános képletű Cys(OH)6 vagy Pro (OH)7 vegyületet egy dipeptiddel, egy védett (NH2)-WZY-nal vagy egy (NH2)-Z-Y-nal reagáltatjuk. A lineáris merkaptán kiindulási anyagok tartalmazhatnak vagy nem tartalmazhatnak a szakirodalomból ismert védőcsoportokat (Qi és Q2) a különböző aminosav egységeken. Ilyen védőcsoportok például a benzil-p-metoxi-benzil-, 1-adamantil-, t-butil-, p-nitrobenzil-, tritil-, benzil-tiometil-, etil-karbamoil-, vagy acetamido-metil-csoport. A benzil-, adamantil- vagy t-butil-csoport higany-(halo)-acetát sók segítségével távolíthatók el vizes metanolban 0—80 °C-on. A védőcsoportot általában a ciklizáció előtt, mint például a pepiidnek a gyantáról hidrogén-fluoriddal való lehasítása során távolítjuk el. Azonban a védőcsoport a ciklizáció alatt, vagy in situ, a ciklizáció előtt is eltávolítható. Az S-acetamido-metil-csoportok különösen előnyösek. Például az S-ACM-Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-S-ACM-Cys-Pro-OBzl-t kálium-karbonáttal kezeltük vizes metanolban, így a Pro sav lineáris pepiidet 78—84%-os kitermeléssel kaptuk. Ezt ezután oxidativ ciklizációnak vetettük alá oxidálószerként vizes metanolos jódot használva, így a kívánt Pro(OG)7 terméket 65—70%-os kitermeléssel kaptuk. Alternatív módon a védett terméket ugyanilyen körülmények között úgy ciklizáltuk, hogy kezdetben jóddal reagáltattuk, majd a védő észter-csoportot kálium-karbonáttal távolítottuk el. A Pro7 savat ezután Arg(NH2).vel kondenzáltuk DMF-ben oldott DCC-t és DMAP-t használva 0— 20 °C-on, így a Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg(NH2)-t 45%-os kitermeléssel kaptuk. A jód lehasítja az S-védőcsoportot, különösen az ACM csoportot és ciklizálja az intermediert. Higany-acetát vagy ólom-acetát szintén eltávolítja az ACM csoportot, és fém-merkaptidot kapunk. Ezt tiollá alakítjuk in situ hidrogén-szulfidot használva, majd egy külön lépésben oxidáljuk. A kívánt ciklikus (I) általános képletű oktapeptidet kényelmesen elválasztjuk a vizes oxidációs elegy megsavanyításával, például jégecetet használva és a reakcióelegyet egy ioncserélő kromatográfiás oszlopon például gyengén savas akrilgyanta oszlopon átvezetve és az anyagot savval eluálva, de gélszűrést is alkalmazhatunk, amikor is az oldatot gyöngy formájúra kialakított, dextrán és epiklórhidrin térhálósításával kapott gélen vezetjük keresztül. A (II) általános képletű lineáris intermedierek ciklizációja alternatív módon úgy is végrehajtható, hogy a ciklizált 6-Cys savakat vagy 7-Pro savakat [melyek (I) általános képletében a láncvégi W és Z egység együttesen, vagy csak az egyik, a Z láncvégi egység hiányzik] megfelelően kondenzáljuk vagy egy W-Z-Y védett dipeptiddel, vagy egy Z-Y aminosavval. A Cys vagy a Pro sav megfelelően védett dipeptiddel vagy aminosavval való reakcióját a peptidkémiában ismeretes amidképzési módszerrel hajtjuk végre. Általában a kiindulási vegyületek lényegében ekvimoláris mennyiségét reagáltatjuk egy karbodiimid, például diciklohexil-karbodiimid és 1-hidroxi-benzotriazol vagy dimetil-amino-piridin jelenlétében szerves oldószerben 0—35 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 0 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten. A védőcsoportokat olyan rektáns segítségével távolítjuk el, mely nem hasítja a hexapeptid gyűrű diszulfid kötéseit, például egy gyenge bázissal. A (II) általános képletű fontos intermediereket könnyen előállíthatjuk a peptid-szintézis szilárd fázisú módszereivel [M. Manning és társai, J. Med. Chem. 25, 46, (1982)]. Kereskedelmi benzhidril-amin-gyantát (BHR) használtunk az (I) általános képletű végtermékek, melyek képletében Y jelentése NH2 (dez-glicinek) előállítására, míg azokat az (I) általános képletű vegyületeket, melyek képletében Y jelentése OH csoport (dez-glicinamidok) klórmetil-gyanta (CMR) segítségével állítottuk elő. A (II) általános képletű lineáris peptidek láncát lépésenként építettük fel a 8-as egység felől az 1-es egység irányában haladva. Minden egységet a peptidkémiában ismert, az alábbiakban ismertetett módon építettünk fel. Egy másik megoldás szerint 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
