196227. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklikus, vazopresszin antagonista peptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

196227

2

juk, és a pH-t 50%-os nátrium-hidroxid oldattal

7,2-re állítjuk be. Az oldatot 0,01 M-os kálium(hexaciano-ferrát) oldattal titráljuk addig, amíg a sárga szín állandósul, ehhez 30 ml oldatot használunk fel. A pH-t 5,4-re állítjuk be jégecet hozzáadásával és az oldatot leszűrjük. A szűrletet H+ formában lévő kationcserélő (Bio-Rex 70) gyanta oszlopra visszük fel, az oszlopot vízzel mossuk, majd 100 ml piridin/acetát pufferrel (30 ml piridin, 4 ml ecetsav, 66 ml víz) eluáljuk. Az eluátumot szárazra pároljuk. A maradékot kismennyiségű 10%-os ecetsavval vesszük fel és vízzel 1%-ra hígítjuk az ecetsavra nézve. Liofilizálás után 650 mg nyers, cím szerinti terméket kapunk.

A nyers pepiidet ellenáramú eloszlással tisztítjuk n-butanol/ecetsav/víz 4:1:5 arányú elegyével, így 33 mg részben tiszta pepiidet kapunk. Ezt tovább tisztítjuk gélszűréssel Sephadex G—15 oszlopon 1%-os ecetsavval, így 24,5 mg tiszta peptidet kapunk.

Aminosav analízis (hidrolízis sósav és trifluor-ecetsav 2:1 arányú, 0,005% fenolt tartalmazó elegyében 1 órán keresztül):

Asp = 1,00; Val = 0,99;

Pro = 0,72; Tyr= 1,04; '

Cys = 0,62; Phe=l,04;

Arg = 0,95.

Peptidtartalom = 71 %.

HPLC: acetonitril/víz/TFA egy csúcs

40:60:0,1 k' =5,2

acetonitril/víz/TFA 45:55:0,1 k'=3,6

Gradiens: 20%-os acetonitril 5' k' =8,7 20—50%-os acetonitril 20'

. 50%-os acetonitril 5'

Tisztaság: 97%

TLC n-BuOA/ecetsav/víz Rf = 0,32

1:1:1

n-BuOA/ecetsav/víz Rf = 0,12

4:1:1

n-BuOA/piridin/ecetsav/víz Rf = 0,50 15:10:3:12

Az extrahált peptides gyanta az aminosav analízis alapján még mindig tartalmaz peptidet, ezért háromszor 50 ml dimetil-formamiddal ismét extraháljuk. A dimetil-formamidot szárazra pároljuk és a maradékot 10%-os ecetsavban feloldjuk, 1% ecetsavtartalomra hígítjuk és liofüizáljuk, így további 260 mg peptidet kapunk. Ennek az anyagnak a FAB tömegspektrumában m/z= 1079, ami megfelel a kívánt ciklikus peptid M + H értékének.

13. példa

Az 1. példa szerinti peptid szintézis során a

2. egységként elhelyezkedő Boc-D-Tyr(Br-Z)-t Boc-D-Phe sztöchiometrikus mennyiségével helyettesítve Pmp-D-Phe-Phe-VaKÄsn-Cys-Pro-Arg-NFh-t kapunk.

Ha a 2-es helyzetben lévő egységet Boc-D-Val-lal helyettesítve és a 2. példa szerinti hasítás-oxidáció

reakciókat használva Pmp-D-Val-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg-t nyerhetünk.

Az 1. példában Boc-D-Leu-t használva Pmp-D-- Leu-Phe-Val-Asn-Cys- Pro-Arg-NH2-t kaphatunk.

Az 5. példában a /?-merkapto-/?,/?-ciklotetrametilén-propionsavat (Tmp) Pmp-vel helyettesítve

Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Abu-Cys-Pro-Arg(NH2)-t kapunk. /3-merkapto-/? ,/3-ciklohexametilén-propionsav esetén a Hmp’ származékhoz jutunk.

Az 1. példában a 2. egység helyére Boc-D-Nl-et-t,

a 8. egység helyére D-Arg(Tos)-t vive Pmp-D--Nle-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-D-Arg-NH2-t kapunk.

A 2. példában a 2. egységet Boc-D-Cha-ra cserél-1 - .................I

ve Pmp-D-Cha-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg-t kapunk.

Az 1. példában a 2. egységet Boc-alfa-amino-fenil-vajsavval (Pba) helyettesítve Pmp-D-Pba-Phe.... y-Val-Asn-Cys-Pro-Arg-NHí-hoz jutunk.

A 3. példában a védett Arg-tJBoc-Lys(ClZ)-vel helyettesítve Pmp Ö-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn Cÿs-Pro-Lys-NHí-t kapunk.

Hasonló módon a következő vegyületeket állíthatjuk elő:

Pmp-D-Met-Phe-Val-Ásn-Cys-Pro-Arg-NH2,

Pmp-D-Tyr(Me)-Phe-VaJ-Asn-Cys-Pro-D-Lys,

Pmp-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg-NH2,

Pmp-D-Tyr(i-Pr)-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg,

Pmp-D-alle-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg,

Pmp-D-Nva-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg-NHí,

Pmp-D-Abu-Phe-Val-Asn-Cys-Pro-Arg-NH2.

14. példa

Parenterális dózisegység készítmények

Az 1. vagy 3. példa szerinti ciklikus oktapeptid 0,5 mg-ját steril száraz por formájában tartalmazó parenterális injekció készítményt az alábbi módon állítjuk elő:

0,5 mg peptid-amint 1 ml vízben oldott 20 mg mannitban oldunk fel. Az oldatot steril körülmények között egy 2 ml-es ampullába szűrjük és liofilizáljuk. A port ismét feloldjuk, mielőtt intramuszkuláris vagy intravénás injekciót adnánk olyan betegnek, aki anti-ADH mechanizmusú ödémában szenved. Az injekciót szükséges esetben naponta í—5 alkalommal vagy folytonos i. v. injekció formájában megismételjük. A találmány szerinti más oktapeptideket is hasonló módon készítjük ki és használjuk fel.

Nazális dózisegység készítmények

30 mg finomra őrölt találmány szerinti oktapeptidet, például a 2. példa szerinti oktapeptidet 75 mg benzil-alkohol és 1,395 g szuszpendálószer, például, hosszabb szénláncú zsírsavak félszintetikus gliceridjeinek kereskedelmi keveréke, elegyében szuszpendálunk. A szuszpenziót egy 10 ml térfoga-5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

13