196226. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, antiamnéziás hatású, tripeptid származékok, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

196226

2

336 mg (1,68 mmól) diciklohexil-karbodiimidet használva — a kapcsolási műveletet is megismételve — kialakítjuk a gyantán a BOC-Pro-Leu-Gly-O-tripeptid-láncot. így BOC-Pro-Leu-Gly-O-gyantát kapunk.

A kapott BOC-Pro-Leu-Gly-O-gyantáról leszívatjuk a reakcióelegyet, majd a BOC-Gly-O-gyantánál megadottak szerint jégecetes hidrogénklorid-oldattal eltávolítjuk a BOC-védőcsoportot, és a kapott H-Pro-Leu-Gly-O-gyantát a H-Gly-O-gyantánál megadott módon 682 mg (3,36 mmól, 4 mól ekvivalens) BOC-GABA-OH védett y-aminovajsawal reagáltatjuk 336 mg (1,68 mmól, 2 mól ekvivalens) diciklohexil-karbodiimid jelenlétében. A leirt ismétléseket is elvégezzük a fentiekben megadott módon.

A reagáltatás végén kapott BOC-GABA-Pro-Leu-Gly-O-gyantáról leszívatjuk a reakcióelegyet, és a gyantát háromszor 30—30 ml diklór-metánnal és etanollal mossuk, majd a Merrifield-edényből eltávolítjuk, szűrőn metanollal mossuk és szárítjuk, végül vákuumexszikkátorban foszfor-pentoxid felett vákuumban megszárítjuk. így 6,68 g cím szerinti gyantát kapunk.

b) BOC-GABA -Pro-Leu-Gly-NHi

2 g fentiek szerint kapott, száraz BOC-GABAPro-Leu-Gly-O-gyantát nyomásálló edényben 20 ml vízmentes metanolban szuszpendálunk, majd a szuszpenzióba —40 °C-on 40 ml cseppfolyós ammóniát vezetünk. Az edényt légmentesen lezárjuk, a reakcióelegyet keverjük, és hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. Ezen a hőmérsékleten tartjuk 48 órán át, majd a nyomást megszüntetjük, az ammóniát és a metanolt elpárologtatjuk. A bepárlási maradékot háromszor 5—5 ml dimetil-formamiddal felvesszük, a szuszpenzióból a gyantát kiszűrjük, a dimetil-formamidos oldatot vákuumban bepároljuk, és a bepárlási maradék formájában kapott cím szerinti nyers peptidet 2,5 ml dimetilformamid és 1,2 ml éter elegyéből kristályosítjuk. 157 mg (80%) tiszta cím szerinti vegyületet kapunk.

Rf8 = 0,1, Rr^O.55, Rf° = 0,l.

Op.: 96—99 °C.

Aminosav analízis: Gly = l,0, Leu = 0,88, Pro = 1,04, GABA = 1,03.

2. példa

Z-D-Pip-Leu-Gly-OCHj

a) Z-Leu-Gly-OCHj

13,27 g (50 mmól) Z-Leu-OH védett leucint feloldunk 75 mi vízmentes kloroformban, az oldatot lehűtjük —15 °C-ra, majd állandó keverés közben

5.5 ml (50 mmól) vízmentes N-metil-morfolint adunk hozzá. Közvetlenül ezt követően a reakcióelegyhez 6,5 ml (50 mmól) klór-hangyasav-izobutilésztert csepegtetünk, és a reakcióelegyet ezen a hőmérsékleten további 5 percig keverjük. Időközben melegítés közben feloldunk 10 ml dimetilformamidban 6,2 g (50 mmól) glicin-metilészterhidrokloridot, az oldatot lehűtjük és hozzáadunk

5.5 ml (50 mmól) N-metil-morfolint.

A fenti két oldatot összeöntjük, és a reakcióelegyet —10 °C-on 1 órán át, majd szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezután vákuumban bepároljuk, a bepárlási maradékot 250 ml etil-acetátban oldjuk. Az etil-acetátos oldatot 100 ml 10%-os vizes sósav-oldattal, vízzel, 10%-os vizes nátrium-karbonát-oldattal és ismét vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton megszárítjuk, szül jük és vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékként kapott olajat éterrel eldörzsölve kristályosítjuk, a kristályos anyagot etil-acetátban oldjuk és petroléter hozzáadásával kicsapjuk. így

10,93 g (65%) cím szerinti vegyületet kapunk.

Op.: 91—92 °C.

RrB = 0,76, RrA = 0,65.

[a]24D= —28,9° (c= 1, metanolban).

Elemanalízis a C17H24N2O5 képletre (M = 336,38):

számított: C = 60,7%; H = 7,19%; N = 8,33%;

talált C = 60,l%; H = 7,08%; N = 8,25%.

b) Leu-Gly-OCHí-acetát

3,36 g (10 mmól) előzőek szerint kapott Z-Leu- Gly-OCHj védett dipeptid-észtert 30 ml 2:1 arányú metano’-ecetsav elegyben oldunk, majd 10%-os palládium/aktív szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés előrehaladtát vékonyréteg-kromatográfiásan ellenőrizzük. Ha már nincs kiindulási anyag a reakcióelegyben, a hidrogénezést befejezzük, a katalizátort kiszűrjük és a szürletet vákuumban bepároljuk.

Bepárlási maradékként 2,0 g olaj formájában marad vissza a cím szerinti dipeptid-észter-acetát.

RrB = 0,11, Rfc = 0,56.

c) Z- D-Pip-Leu-Gly-OCHj

2,6 g (10 mmól) Z-D-Pip-OH védett D-pipekolinsava: feloldunk 10 ml vízmentes kloroformban, hozzáadunk 1,1 ml (10 mmól) vízmentes N-metilmorfolint, és az oldatot állandó keverés közben —15 °C-ra hűtjük. Közvetlenül ezután a reakcióelegyhez 1,34 ml (10 mmól) klór-hangyasav-izobutilésztert csepegtetünk, és a keverést még 5 percig ezen a hőmérsékleten folytatjuk.

Időközben 2,0 g fentiek szerint kapott Leu-Gly- OCH3-acetátot (10 mmól) feloldunk 10 ml vízmentes kloroformban, hozzáadunk 1,65 ml vízmentes N-metil-morfolint, majd az oldatot 0 °C-ra hütjük. Ezen utóbbi oldatot a fentiek szerint készített vegyes anhidrid-oldathoz adjuk, majd a reakcióelegyet —15 °C-on 1 órán át és szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a bepárlási maradékot 100 ml etil-acetátban oldjuk. Az etil-acetátos oldatot 50 mi 10%-os vizes sósav-oldattal, 50 ml 10%-es vizes nátrium-karbonát-oldattal és 50 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal vízmentesítjük, szűrjük és vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot éterrel kristályosítjuk és 10 ml etanol és 10 ml víz elegyéből átkristályosítjuk. 3,03 g (68%) cím szerinti védett tripeptidészteri kapun k.

Op : 129—130 °G.

RrA = 0,77, R,D = 0,74.

[a]:4°= —5,9° (c = 1, etanolban)

A nagynyomású folyadékkromatográfiás mérés szerint a termék tisztasága nagyobb, mint 90%.

Arrinosav analízis: Gly=l,0, Leu = í,08, D-Pir=0,95.

6