196202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-(4-[2,3-d]-pirimidin-6-il)-alkil-benzoil-L-glutaminsav származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196 202 2 Biol. Chem., 236., 611. (1961.)] és az eredményeket a 2. táblázatban mutatjuk be. 2. táblázat Avcgyüict száma ICjoM 1. 9,2x10-5 2. 7,7x10-5 3. 9,2xl0-4 4. >lxl0-3 Egér májból nyert részlegesen tisztított folát-poliglutamát szintetáz (FPGS) enzimet [specifikus aktivitás = 1,2 nmol/óra (protein mg)] 1 órán át 37°C-on inkubáltunk a vizsgálandó vegyületekkcl. 6 különböző koncentráció esetén parallelben teljes telítési görbéket vettünk fel Moran és munkatársai módszerével [Anal. Biochem. 146., 326. (1984.)]. Az ezek alapján kapott eredményeket a 3. táblázat mutatja. 3. táblázat Avegyiilct száma Rcl*K„ Rel*Vm„ 1. 0,86+0,11 0,3510.02 2. 0,68+0,14 0,9010,10 3. 0,23+0,01 1,6110,05 4. 0,05+0,02 1,24+0,10 fh4 0,05±0,01 T 1,3110,07 T * fólsavra vonatkoztatott érték 30 T Irodalmi adat [Moran és munkatársai: Biochemistry, 23., 4580. (1984)]. A vegyiiletek hatását L—1210 egér leukémia sejtekre szövettenyészetben Folcy és munkatársai 35 módszerével [Biochem. Pharmacol., 16., 658. (1967.)] vizsgáltuk, az eredményeket a 4. táblázat mutatja. 4. táblázat 40 Avegyiilct száma IC*,M 1. 1,7x10-3 2. >10-4 3. 3,3xl0-‘) 4. 5,9xl0-8 BDF, egerekbe peritoneálisan IO-5 L1210 leukémia sejtet oltottunk át, majd 9 napon át intraperitoneálisan adtuk be az állatoknak a vizsgálandó 50 vegyületeket. Az élettartam növekedést (ILS) és a beadott dózisokat az 5. táblázat mutatja. Avegyiilct száma 5. táblázat Dózis mg/kg %-os ILS 55 1, 4 130 3. 1 111 4. 2 27 4 35 8 59 12 63 Az N-/4-[2-(2-amino-4-hidroxi-5.6,7,8-tctrahídro-pirido [2,3-d] pirimidin-6-il)-ctil]-benzoil/-L-glutaminsav egyedülállóan jó antimetabolit. Míg az L1210 leukémia elleni hatása a metotrexátéval összemérhető, a dihidrofolát reduktázra csak enyhe hatást gyakorol; ez a körülmény arra utal, hogy a vegyülct valamely inás folát-típusú enzimre hat, s nem a DHFR enzimre. Ezt a feltevést az is alátámasztja, hogy a vegyüld mctotrcxát-rczisztens sejtekkel szemben is hatásos. A vegyüld hatását metotrexát-rczisztens L—1210 leukémia sejtekre a 6. táblázat mutatja. 6. táblázat Avegyiilct Átlagos Dózis ólcttartam(mg/kg) növekedés (nap) Kontroli — 0 metotrexát 2 0 4. 2 +8 4. 4 +11 4. 8 + 17 4. 12 x25 A találmány szerinti vegyületeket a megfelelő (II) általános képlctű glutaminsav-származékokból — a képletben R' és R3 a már megadott jelentésű és R1 es R3 a már megadott jelentésű és R4 egy (XIII) vagy (XIV) általános kcplctű csoportot — ahol R7 hidrogénatom vagy aminocsoport megvédésére alkalmas csoport — jelent és Rs valamint R* azonos vagy különböző, karboxilcsoport megvédésére alkalmas csoport — a vcdócsoportok lehasításával állítjuk dó. A védócsoportok Ichasítását ismert módon, hidrolízissel vagy hidrogénczcsscl végezzük. A védőcsoportokat és a védócsoportok lehasításának módját például az alábbi irodalmi helyeken ismertetik: Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, London and New York, 1973., Greene, Th. W.: Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1981., The Peptides, I. kötet, Schröder and Lubke, Academic Press, London and Now York, 1965. és Houben—Weyl, Methoden der organischen Chemie, 4. kiadás, 15/1. kötet, GeorgThicmc Verlag, Stuttgart, 1974. A hidrolízist normális hőmérsékleten savas vagy lúgos vízben, így például vizes alkálifém-hídroxid és adott esetben vízzel elegyedő szerves oldószer (például metanol, etanol, tetrahidrofurán, dimetilformamid vagy hasonló) jelenlétében, vagy víz és valamely sav, például trifluor-ecetsav jelenlétében végezzük. Bázis jelenlétében végzett hidrolízis esetén mindkét karboxilcsoportján kationnal helyetesített glutamát-só képződik, amelyből például ccetsawal történő savanyítással csapható ki a megfelelő szabad sav. Az így kapott termékek magas hőmérsékleten olvadó kristályos vagy mikrokristályos anyagok. A védőcsoportok hidrogenolízíssel történő eltávolítását ugyanúgy végezhetjük, minta (ifi) általános képlctű vcgyülctek hidrogénezését, amelyet az alábbiakban részletezünk. A (Ií) általános kcpletű kiindulási. anyagok a megfelelő (III) általános képlctű pirido [2,3-d] 3
