196192. lajstromszámú szabadalom • Eljárás [di(terc-butil)-benzilidén]-tiazolidinon származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
9 196!92 10 Vizsgált vegyület Dózis/Bevitel módja Százalékos gátlás 100 mg/kg P. 0. 55% Ilb 0.1% étrenddel 61% IIc 0.1% étrenddel 67% Azati-50 mg/kg P. 0. 57% oprin D-Peni-100 mg/kg P. 0. 60% cillamin 200 mg/kg P. 0. 73% Acetami-100 mg/kg P. 0. 69% nofén Dexame-3 mg/kg P. 0. 62% tazon 1 mg/kg P. 0. 70% Kollagén-indukált ízületi gyulladás-teszt II. típusú kollagént Stravich és Nimni módszerével {(Biochemistry, 10, 3905 (1971)] izoláltak szarvasmarha ízületi porcból. A kollagént 0,1 M-os ecetsavban oldották és -20 aC-on tárolták. Az oldatot 2 mg/ml koncentrációjúra hígították és azonos mennyiségű inkomplett Freund-ad juvénssal (ICFA) alaposan emulgeálták. Ezt a kb. 0,5 mg kollagént tartalmazó emulziót a 0. napon intradermálisan beltenyésztésű Lewis hím patkányok hatos csoportjaiba oltották a háti terület különböző részein (Charles River Breeders, 170-200 g). A teszt időszakában hetente háromszor mérték és rögzítették az egyes patkányok talptérfogatát a gyulladásos reakció mértékének megállapítása céljából. A tesztállatok a tesztelendő vegyület karboximetilcellulóz-hordozóval készült szuszpenzióját kapták orálisan hetente 5 napon át (hétfőtől-péntekig) az 1. naptól kezdve. A kontrollállatok csak hordozót kaptak tegztanyag nélkül. A vizsgálat végeztével (28. vagy 30. nap) ezen állatok vérét a szív átszúrásával lecsapolták és a szérum II. típusú kollagén elleni antitest-szintjét passzív hemagglutinációval állapították meg glutáraldehiddel kezelt birka-vörősvértesteket használva, melyek felületéhez Il-es típusú kollagént kapcsoltak [Avrameas és mtsai., Immunochemistry, 6, 67 (1969), Andriopoulos és mtsai., Arth. Rheum., 19, 613 (1976)]. A Il-es típusú kollagénre adott sejt-választ vagy késleltetett-tipusú hiperszenzitivitáB-választ a radiometriás fül-teszttel mérték [Kostiala, Immunology, 33, 561 (1977)]. Egyes kísérletekben a Il-es típusú kollagénnel történő immunizálás következtében fellépő csonLkárosodást és a gyógyszer hatásait az egyes csoportokból választott két-három reprezentatív állat talpának radiográfjából állapították meg. Kollagén-II-mentes ICFA befecskendezése szolgált egyes esetekben negatív kontrollként, ezek az állatok csak karbometoxi-cellulóz-hordozót kaptak a vizsgálat során. A vizsgált vegyületek teszteredményeit a kollagén-indukált ízületi gyulladás esetében a III. táblázat foglalja össze. A %-os gátlást a következő képlet alapján számolhatjuk: Vt-Vv %-os gátlás = (1 - -----------------) x 100 Vc-Vv ahol Vt a vizsgált anyaggal kezelt állatok talptérfogata (teszt-csoport), Ve a vizsgálati anyag mentes kezelésben részesült állatok talptérfogata (csak karbometoxi-cellulóz-hordozó - kontroll csoport) és Vv a hordozóval (karbometoxi-cellulóz) kezelt állatok talplérfogata, melyek kollagén-II-mentes ICFA-t kaptak (negatív kontroll csoport). III. Táblázat Kollagén-indukált izületi gyulladás gátlása Vizsgált vegyület Dózis mg/kg' %-os gátlás' Ha 50 100 50 53 Ilb 30 91 50 100 30 50 IIc 50 79 'Kísérleti eljárás leírása a szövegben található. Adjuváns-indukcióval kifejlődő izületi gyulladás-teszt patkányokban A vizsgálatok kiterjedtek a vegyületek hatásosságára patkányokon ad juváns-indukcióval keltett ödémákkal járó csontkárosodások és talpduzzanatok visszaszorítása terén. Az adjuváns-indukált ízületi gyulladással járó talpduzzanatok gátlásénak kvantitatív meghatározása céljából a gyulladás két fázisa definiálható: (1) Elsődlegesen és másodlagosan beoltott talpnál és (2) másodlagosan a be nem oltott hátsó talpnál, amely általában a beoltott talpon keletkezett gyulladás kialakulásától számított kb. tizenegyedik napon kezd kifejlődni. Ez utóbbi gyulladás csökkentése az immunszupresszív aktivitás jellemzője [Cf. Chang. Arth. Pheum., 20, 1135-1141 (1977)]. Adjuváns artritisz kiváltása hím LewiB Wistar patkányokon (200-210 g) a jobb hátsó talpba fecskendezett egyetlen 0,1 ml-nyi, hővel elölt, liofilizált Mycobacterium tuberculosis (Calbiochem-Perrigen-C)] 0,551-os ásványolajon szuszpenziójának bőr alá fecskendezésével történt [Winter és mtsai., által közölt 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 GO 65 6
