196170. lajstromszámú szabadalom • Eljárás [(1,3-dioxo-1,3-propán-diil)-diimino]-bisz-benzoesav származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 Az (1), a (2) és a (3) komponenseket a (4) komponens 5%-os vizes oldatával összedolgozzuk, szárítjuk, majd granuláljuk. Ehhez az anyaghoz az (5) és a (6) komponenst hozzáadjuk és elegyítjük. Az elegyet kapszulánként 200 mg mennyiségben 3. számú kemény kapszulákba töltjük. Az előbbi 40. és 41. példákban a hatóanyag alatt az (F) általános képletŰ vegyületek valamelyikét értjük. 1. Vizsgálati példa Anti-hialuronidáz aktivitás Ismeretes, hogy az allergia ellenes szerek, például a dinátrium-kromoglikát (DSCG), a tranilast, stb. gátolják a hialuronidáz aktivitást, a 48/80 vegyület és a polimixin B pedig, amely anyagok hízósejtből hisztamint szabadítanak fel, aktiválják a hialuronidázt. A hialuronidáz gátló hatás az aŰergia ellenes hatás indexeként tekinthető [Lásd az 5. Orvosi Kémiai Szimpózium (1983. december 9—10., Kyoto) előadásai szinopszisának 68. oldalán.] A találmány szerint előállított vegyületeket az anti-hialuronidáz hatás vizsgálatának eredményei alapján kiváló aktivitásúnak találtuk. A vizsgálati módszer a következő: 0,1 ml pufferolt hialuronidáz oldatot vizsgálócsőbe helyezünk és a különböző vizsgálandó vegyületek különböző koncentrációjú pufferolt oldataiból egy•egy csőhöz 0,2 ml-t adunk. Az elegyet 37 °C-on 20 percig eiőinkubáljuk. Ezután az elegy térfogatát valamely aktiváló anyaggal, például 48/80 vegyülettel vagy CaClj -dal 0,5 ml-re egészítjük ki, azaz ezekből 0,2 ml-t adagolunk, és a kapott elegyet 37 °C-on 20 percig inkubáljuk. Ezután 0,5 ml pufferolt kálium-hialuronát oldatot adunk hozzá, majd az elegyet 37 °C-on 40 percig inkubáljuk. Lehűtés után 0,2 ml 0,4 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk az elegyhez és semlegesítjük. Ezzel a reakciót leállítjuk. A kapott termék optikai sűrűségét 585 nm-en mérjük (ODsas) módosított Morgan-Elson módszerrel. Kontrollként azonos módon kezelt mintát alkalmazunk, de a vizsgálandó vegyület pufferolt.oldata helyett 0,2 ml pufferoldatot vagy vizet adunk a hialuronidáz oldathoz, a továbbiakban a vizsgálandó mintánál leírt módon járunk el. (A hialuronidáz végső koncentrációja 340 NF egység/ml.) (kontrollOD5gS-mintaOD585) • 100 Gátlás ---------------------------------------------------------kontroll ODsgs Eredményeinket a 2. táblázatban ismertetjük. 2. Táblázat Vegyület ICso (mmól/1) Vegyület IC50 (mmól/1) 01. 0,077 26. 0,020 02. 0,900 (ICjo) 27. 0,030 04. 0,015 (IC,o) 28. 0,110 05. 1,320 (IC, o) 29. 0,020 06. 0,013 30. 0,010 07. 0,660 (ICio),0,720 ac,0) 31. 0,025 08. 0,220 (IC,0) 32. 0,025 09. 0,134 33. 0,015 11. 0,022 34. 0,025 12. 0,065 35. 0,015 13. 0,055 36. 0,025 15. 0,055 37. 0,017 16. 0,010 38. 0,023 17. 0,142 39. 0,040 18. 0,290 (IC, o) 40. 0,035 19. 0,013 41. 0,060 20. 0,040 42. 0,025 21. 0,015 43. 0,040 22. 0,008 44. 0,073 23. 0,030 45. 0,010 24. 0,020 46. 0,030 25. 0,013 49. 0,030 50. 0,050 Mint a táblázatból látható, valamennyi vizsgált vegyület erős hialuronidáz-aktivitást gátló hatással bír. 2. Vizsgálati példa Passzív bőr-túlérzékenység elleni (PCA) hatás , patkányban A vizsgálati módszer a következő: Wistar törzsbe tartozó patkányokat ovalbuminnal szenzitizálunk, segédanyagként alumíníum-hidroxid-gélt és Bordetella Pertussis vakcinát alkalmazunk. 14 nap múlva vett vérmintákból származó antiszérum 16-szoros és 32-szeres hígítását azonos törzsbe tartozó patkányok hátbőre alá 0,1 ml mennyiségben szubkután beadjuk, majd a patkányokat 48 órán át tenyésztjük. A minta oldatát az állatoknak perorálisan beadjuk, majd 1 óra múlva ovalbumin antigén és Evans-kék színezék elegyet adunk ismert módon az állat farkának vénájába. 30 perc múlva az állatokat kivéreztetve leöljük, és megmérjük az antiszérum injekció beadásának helyén a hátbőrön keletkezett kék folt területét (hosszú átmérő x rövid átmérő). így a kontroll állatokon mért átlagos értékhez hasonlítva megkapjuk a gátlás mértékét. Eredményeinket a 3. táblázatban ismertetjük. 196.170 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 19
