196079. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-metil-15alfa-alkil-androszta- 1,4-dién-3,17-dion-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 196 m A találmány l-metil-15o(-alkil-androszta-l,4-dién-3,17-dionok előállításra szolgáló eljárásra, valamint az ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészít- 5 mények, előállítási eljárására vonatkozik. A fenti vegyületek újak és azokat az (I) általános képlet szemlélteti, ahol R15 valamilyen 1-4 szénatomos alkilcsoport, amely adott esetben az 1- vagy a 2-helyzetben hidroxilcsoporttal vagy 2-7 szénatomos alkanoil-oxi- 10 -csoporttal illetve 1,2-izopropilidén-dioxi-csoporttal helyettesítve lehet. Előnyös Rl5 helyettesítők az alábbiak, mimellett ezekben R’ hidrogénatomot vagy valamilyen 2-7 szénatomos alkanoilcsoportot képvisel: 1 c 0 p-ch3, -C2H5. -C3H7, -c4h9, -ch - ch-ch2-ch3, -ch2. CH2-CH3. -CH-CH2CH3,-CH-CH2-CH2-CH3 Lr OR’ OR’ OR’ 20 és-ch2-ch-ch2-ch3. OR 2-7 szénatomos alkanoilcsoportként különösen alkalmas az acetilcsoport. a propionilcsoport, a butirilcsoport, valamint a valerilcsoport. Azt találtuk, hogy az (l) általános képletű új vegyületek aromatázgátló hatással rendelkeznek és így gátolják az ösztrogének bioszintézisét. Ismert aromatázgátló vegyület a 4-hidroxi-4-androsztén-3,17-dion a találmány szerinti vegyületek ehhez képest nagyobb mértékben csökkentik az ösítradiol koncentrációt a szérumban. Az infantilis nőstény patkányok egységesen nagyobb mértékű szteoridképződéSsel reagálnak a PMSG-vel történő kezelésre (PMSG = Pregnant Mare’s Serum Gonadotropin azaz terhes kancák szérumából kinyert gonadotropin). Az aromatázaktivitást a PMSG-vel stimulált ösztrogénképződés befolyásolása által lehet mérni. Az úgynevezett PMSG-teszt során 21 napos nőstény patkányoknak kétnaponként 100 I. U. (N. E.) PMSG-t adunk be szubkután. Az említett dózist hét ízben adjuk be az állatoknak, majd az utolsó PMSG-injekció előtt 1 órával és az említett utolsó dózis beadása után 8 órával (dI2) ugyancsak szubkután beadjuk az állatoknak a vizsgálni kívánt vegyületet 0,1 ml benzil-benzoát - ricinusolaj (1+9) elegy ben. A kontrolláltatok csak vehikuíumot kapnak. Az utolsó PMSG-dózis beadása után 24 órával a kísérleti állatokat leöljük, és a szérumokban radioimmunológiai módszerrel meghatározzuk az ösztradiolt. A vizsgálatot 10-10 állatból álló csoportokon végezzük és az ösztradiol-koncentráció középértékét a standard eltéréssel együtt kiszámítjuk, majd ezt nanomól/liter mértékegységben kifejezzük. A kontrollcsoportokhoz képest megmutatkozó különbségek szignifikancia-értékeit variációs analízissel számítjuk ki. A vizsgált vegyületnek a standard összehasonlító vegyületekhez viszonyított relatív hatáserősségének meghatározása céljából regressziós és kovariációs analízist végzünk. Ezen túlmenően kiszámítjuk a 25 30 35 40 45 5C 55 60 gátlást a PMSG-kontrollokhoz képest és azt százalékban fejezzük ki. A találmány szerinti vegyületek közül a B jelű 15-(ace toxi-e til)-1 -metil-androszta-1,4-dién-3,17-dion példáján mutatjuk be, hogy a találmány szerinti vegyületek a szérumban levő ösztradiol koncentrációját sokkal nagyobb mértékben csökkentik, mint az ismert 4-hidroxi-4-androsztén-3,l7-dion (ez utóbbit A-val jelöljük). Miközben a találmány szerinti vegyületek már 2x0,1 mg alkalmazása esetén gátlást fejtenek ki az ösztradiol-koncentrációra, ilyen hatás az összehasonlításra szolgáló vegyületnél csak 2x1,0 mg alkalmazásakor észlelhető. TÁBLÁZAT A perifériás szérumban levő ösztradiol-koncentrációra gyakorolt befolyás, PMSG-vel előkezelt patkányokon Dózis mg/állat s. c. n ösztradiolkoncentráció nanomól/liter Gátlás % PMSG-kontroll 10 3.42 ± 0,56 0 1 10 3,98 ± 1,12 — 0.3 10 3,84 ± 0,84 — A 1.0 10 1,94 ± 0,62 44 3,0 10 0,98 ± 0,19 71 0,1 10 2,11 ± 0,39 38 0,3 10 0,62 ± 0,13 82 B 1.0 10 0,54 ± 0,07 84 3,0 10 0,36 ± 0,06 89 n = az egy-cgy csoportban levő kísérleti állatok száma Egy további tesztben meghatároztuk hogy miként befolyásolják az aromatázgátlók patkányokon az ösztrusz ciklusát. Ehhez a találmány szerinti vegyületek közül a 15oí-(lS-butiriloxi-etil)-l-metil-androszta-l ,4-dién- 3,17-diont használtuk példaképpen (a továbbiakban C jelű vegyület). Biológiai alap Azok az anyagok, melyek az ösztrogének bioszintézisét illetve az ösztrogének hatását gátolják, rágcsálókon az ösztruszciklus zavarát idézik elő. Módszer Mintegy 180 g testsúlyú nőstény patkányokat (SPF-Wistar) használunk kísérleti állatként, ezekből tíztagú csoportokat alakítunk ki. A ciklust Allen-Doisy féle kenetvizsgálati módszerrel naponta vizsgáljuk és egymást követő két ciklust kísérünk figyelemmel.. A kísérletbe csakis olyan állatokat vonunk be melyeknél szabályos 4 napos ciklust lehet észlelni. A metösztrusz napján az állatok szubkután egyszeri dózist kapnak a vizsgálni kívánt vegyületből. A beadott dózis. 20 mg/állat és a vizsgálni kívánt vegyületet 0,9%-os nátrium-klorid-oldatban Myrj-53 - mai (0,085%) szuszpendálva adjuk be (0,5 ml/dózis). A kontrolláljatok kezelést nem kapnak. A kísérletet akkor tekintjük befejezettnek, ha minden kezelt állatnál helyreáll a normális ciklus. Eredmény A 30 napig tartó kísérlet során a kezeletlen álla-2
