195971. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagytisztaságú lanatozid C előállítására
5 195971 6 és besűrítés után kapott maradék tisztítását benzol-metanol-víz elegyében, előnyösen 10: :8:7 tf-arónyú elegyében végezzük, a primer glikozid-keveréket a vizes-metanolos oldatból ismételt benzolos extrakció, derítés, szűrés, bepárlás, a metanolos oldat pH ériekének 4- -5-re állítása és etilacetót hozzáadása után az elegy lehűtése révén kivált kristályok lehűtésével, ismert módon, kinyerjük, majd mosás, szárítás, a glíkozidkeverék feloldása és diklórelén-kloroform-eleggyel végzett extrahálása útján a nyers Lanatozid C-t ismert módon izoláljuk, a terméket diklórmetán-etanol 8:1-10:1 arányú, előnyösen 9:1 térfogatarányú elegyében oldjuk, az oldhatatlan szennyező anyagot elkülönítjük, a szűrletet bepároljuk, majd a Lanatozid C-t ismert módon, etanolos mosás után izoláljuk. A találmány szerinti eljárás egy előnyös kivitelezési módja szerint úgy járunk el, hogy a metanollal enzimgátolt drogot, vagy friss növényt előnyösen 25-35 tf% metanolt tartalmazó vizes metanolos eleggyel extraháljuk, töményebb metanolos oldat alkalmazása esetén ugyanis nagyobb mennyiségű ballasztanyagot is kioldanánk a növényből, míg hígabb metanollal a glikozidok kiextrahálása nem lenne tökéletes. Hasonló okokból a vizes-metanolos extraktum metanol-tartalmát előnyös 50 tf%-ra beállítani, így a legeredményesebb a kloroformos totólextrakció. A kloroformo8 extraktum bepárlása után nyert, ballasztanyagokat és Lanatozid A, B, C-t tartalmazó maradékot előnyösen 10:8:7 térfogatarányú benzol-metanol-víz elegyében osztjuk meg, majd a hatékonyabb tisztítás érdekében a Lanatozid A, B, C-t tartalmazó vizes-metanolos fázist még 2-3-szor 1/2-1-szeres térfogatú benzollal kirázzuk. A Lanatozid A, B, C-ből a Lanatozid C elkülönítését célzó, úgynevezett szelektív exlrakciót előnyösen 5:5:2:1 térfogatarányú metanol-víz diklóretán-kloroform-eleggyel végezzük, majd a glíkozidkeverék jobb szétválasztása érdekében a vizes-metanolos fázist 2-3-szor kirázzuk a vizes-metanolos fázis térfogatéra számolt 0,15-0.3-szoros térfogatú diklóretán-kloroform 2:1 térfogatarányú elegyével. A Lanatozid C-t tartalmazó vizes-metanolos oldathoz a bepárlás előtt, a termék esetleges bomlása elkerülése érdekében, valamilyen gyenge savat, pl. citromsavat, vagy bórsavat, előnyösen a kiindulási Lanatozid A, B, C tömegére számolt 1/2-szeres tömegű bórsavat adunk. Á nyers Lanatozid C tisztításához használt 9:1 térfogatarányú diklórmetán-etanol-elegyet az anyag tömegére Bzámolt 8-13- -szoros, előnyösen 10-szeres térfogatban alkalmazzuk. Ez a mennyiség biztosítja legjobban, hogy a termék feloldódjon, míg a főként szaponinokat tartalmazó szennyezés teljes mértékben oldhatatlan, kiszűrhető. 4 A találmány szerinti eljárás előnye, hogy a szaponinok eltávolítása igen jelentős hatásfokú. A korábbi eljárásokkal szemben egyáltalán nem használunk nehézfém-vegyüleleket (vas, ólom, stb.), melyek jelenléte gyógyszerkészítményekben tiltott. Mindezen előnyök együttes hatásaként elértük, hogy a termék hatóanyagtartalma meghaladja a 97%-ot és a társglikozid-Bzenynyezések összesen nem érik el a kvantitatív vékonyrétegkromatográfiés módszerrel mérhető 2%-ot (ez a mennyiség a gyógyszerkönyvi követelmények felső határa közelében van), jelenleg már csak az ilyen anyag a piacképes termék. Az eljárás ezt a jó minőségű terméket úgy biztosítja, hogy a kiindulási drog hatóanyagtartalmára számolt kitermelése nem rosszabb, mint az eddig ismert eljárásoké, amelyek viszont lényegesen gyengébb minőségű terméket biztosítottak. Eljárásunkat az alábbi példákon mutatjuk be, anélkül, hogy igényeinket kizárólag ezekre korlátoznánk: 1. példa 1 kg Digitalis lanata droghoz (Lanatozid-C tartalom: kvantitatív vékonyrétegkromatográfiás méréssel: 1,8 g az 1 kg drogban) az enzimgátlás céljából 2 1 metanolt adunk és szobahőmérsékleten 2 órán keresztül állni hagyjuk. Ezt követően 3 1 30%-os vizes metanolt adunk a droghoz és 1 órán keresztül keverjük, majd szűrjük. A drogot még kétszer 3 1 30%-os vizes metanollal extraháljuk, majd az egyesített vizes-metanolos extraktum metanoltartalmát 50 tf%-osra állítjuk. A vizes metanolos oldatot 3x2000 ml kloroformmal kiextrahéljuk, majd az egyesített kloroformos oldatot vízmentes nátriumszulfátal szárítjuk, szűrjük. A kloroformos oldatot csökkentett nyomáson legfeljebb 50 °C-on bepároljuk. A bepárlás utolsó szakaszában metanolt adunk a sűrítményhez és folytatjuk a bepérlást. Ezt a műveletet többször ismételve, végül kloroformmentes metanolos oldathoz jutunk. Az oldat térfogata 150-160 ml, amikor ehhez 140 ml vizet és 200 ml benzolt adunk, összerázzuk, elválasztjuk. A benzolos extrakciót még kétszer 150 ml benzollal megismételjük. A vizes-metanolos oldatot 2 g aktív szénnel derítjük, 50 ml metanol-víz 1:1 térfogatarányú elegyével mossuk, vákuumban 20-25% metanol tartalomig bepároljuk. Az elegy pH-ját ecetsavval 4-5 közé állítjuk, majd 50 ml elilacetótot adunk az oldathoz és 4 napig 0-5 °C-on keverés közben kristályosítjuk. A kristályokat szűrjük, vízzel mossuk, szárítjuk, A száraz Lanatozid A+B+C tömege 2,0-2,5 g. 2,2 g Lanatozid ABC-t 70 ml metanolban oldunk, majd keverés közben 70 ml vizet adunk az oldathoz. A vizes-metanolos oldatot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
