195970. lajstromszámú szabadalom • Eljárás digitális lanata glikozidjainak elválasztására és meghatározására
4 195970 5 1. táblázz t Műveletek ismert találmány szerinti el, metanolos vizes extrakció esetében-poritás szárazon + -— _-extrakció lOx-es mennyiségű 70%-os etanollal + _-10% szárazanyag tartalmú homogenizálum készítés _ + +- a homogenizálum őrlése+- a homogenizátum erőteljes rázatása (extrakciója) + +- adott esetben a szilárd növényi mátrix és u fehérjék eltávolítása _ X +- forralás vízfürdőn +- -- ólomacetátos derítés- a csapadék elválasztása +- a felülúszó 4x-ea extrakciója +- a két folyadék fázis elválasztása +- kíméletes szárazra párolás +- a száraz anyag feloldása- ultra szűrés +X- HPLC + + + A táblázatban a „+" jel a kötelezően elvégzendő-, az „x” jel a fakultatív-, a a szükségtelen műveleteket jelenti. A táblázatból megállapítható, hogy- a találmány szerinti eljárás megvalósításához mintegy 5 műveleti lé- 35 pésre van szükség, szemben az eddig ismert legkorszerűbb módszer 11 műveletével,- a két eljárás időigénye - a találmány javára - milyen mértékben csökken, és- a lecsökkenteti műveletek száma következtében az anyagveszteség is a találmány szerinti eljárásnak kedvez. 45 A találmány tárgya eljárás a Digitalis lanata glikozid jainak elválasztására éö/vagy meghatározására nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel RP-Cjs típusú reverzfázisú oszlopon, oly módon, hogy 50 a) a növényi levelet vízben vagy kis szénatomszámú alkanolban, előnyösen metanolban szuszpendáljuk, a szuszpenziót nagy fordulatszámú örlőberendezósben 55 megóröljük, a kapott bzubzpenziót erőteljesen rázatjuk, majd kívánt esetben a szilárd növényi mátrixot és fehérjéket eltávolítjuk, vagy f,( b) a nyers glikozid-kevcrékel vízben, vagy kis szénatomszámú alkanolban, előnyösen metanolban oldjuk, majd a kapott felülúszót vagy a nyers glikozidkeverék oldalét RP-Cis típusú reverzfázisú oszlopon nagynyomású folyadék kromatogrófon választjuk el, kívánt esetben a glikozidokat az egyes frakciókból ismert módon kinyerjük. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott készülékek és anyagok: UPLC készülék: Labor MIM pumpa és UV-detektor Reverz fáztBÚ oszlopok paraméterei és típusai: RP-Cis; lO^um-eR töltet; 25 cm hoszszúságú; 4,5 mm átmérőjű. Labor MIM, LiÜhrosorb (Chromatronix) és Dimesil (Chromatronix) A Chromatronix gyártmányú LiChrosorb, valamint Dimesil oszloppal mintegy 200-200 kromatografélást végeztünk (mindkét oszlop 100 bar alatti nyomással működtethető 1 cmVperc folyási sebességnél). Vortex készülék: Vortex-genie (Scientific Industries, Inc., USA). Anyagok: Digitalis glikozidok (Merck, Darmstadt, NSZK, illetve Richter Gedeon Vegyészeti Gyér Rt., Budapest), Digitalis lanata (Szegedi Biológiai Köz1
