195956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált antra [1,9-cd] pirazol-6(2H)-on származékok és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1.95950 10 példa 2- (dimot,il-amino)-etil |-7-(l2-(tlieUI—run i no)—cil.i i |-nminoJ-antra[ 1,9-cdJpirazol—(i(ülI)—cirt előállítása . 2,1 g (0 rninál) 7-klór-2-[2-(dietil-amiiioJ-cl.il |-antra[ l,9-cc/]pirazol-6(2H)-on, G ml (DG Minői) 17,/V-dietil-etilón-diamin és 20 ml piridin keverékét 28 órán keresztül visszafolyatási hőmérsékleten tartjuk, majd a reakciókeverékét feldolgozva 1,9 g száraz terméket kapunk 0,2 ekvivalens vízzel szolvatált 2,0 ekvivalens sósavas sója formájában. Olvadáspont: 292-294 °C (bomlik). .7. példa 2-{2-[ (2-hidroxl-etil)-amino]-etil}7-{[2- -(2-hidroxi-etil)-amino]-etil-amino}-antra[l,9- -cc/]pirazol-G(2//)-on előállítása 1,9 g (5 mmól) 7-klór-2-{[2-[(2-hídroxi-etil)-amino]-eLil]}-antratl,9-cd]pirazol-G(2//)-on, 2,0 ml (20 mmól) 2-(2-amino-etil~amino)-etnnol és 20 mi piridin keverékét visszafolyatási hőmérsékleten 72 órán keresztül tartjuk. A reakciókeveréket ezután hűtjük, bepároljuk és szilikagóleri 0,5% Lrietil-amint Lartalmuzó diklór-metánnal kromatografáljuk és 2-10%-os metanollal gradiens eluciót végezve a cím szerinti terméket kapjuk. A sókópzésl elvégezve 500 mg dm szerinti vegyületet kapunk annak 0,4 ekvivalens vízzel szolvatált 2,0 ekvivalens sósavas sója formájában. Olvadáspontjai 285-287 ”C (bomlik). A 7-klói— 2-/[2-[ (2-hidroxi-elil)-amino]-etil]/ant.ra[ 1,9- cdJpirazol-G(2//)-out az alábbiak szerint állítjuk elő: I 1,1 g (40 mmól) l,5-dikiór-9,10-antracén-dion, 13,1 g (110 mmól) 2-[(hidrazino-etil)-nminoj-etanol, 4 g vízmentes káliumliidrogén-karbonát, 1 g vízmentes kéliumriuorid és 110 ml dímetil-szulfoxid keverékét egy éjszakán keresztül 70 °C hőmérsékleten: keverjük. A reakcióelegyet fagyasztjuk, és a szilárd részecskéket szűréssel elkülönítjük, vízzel mossuk, majd acetonitriles kezeléssel a kapott anyagot 2-propanollal kristályosítva 5 2,6 g terméket kapunk. A sósavas só olvadáspontja: 272-273 °C (bomlik). HCT-8 (emberi vastagbél-rák) sejteket Tripszin-EDTA komplexxel kezelünk. Az egy- 10 -sejt szuszpenziót a sejtek 20 cm-’-es fecskendővel ellátott 26-os méretű tűn történő átáramoltaLásával valósítottuk meg. A sejt szuszpenziöt RPMI 1G40 táptalajt (Gibco Laboratories) +10% szarvasmarha-embrió mag- 15, zatviz szérumot +50 pg/rnl garamicint tartalmazó közeget alkalmazva, körülbelül 30 000 sejt/ml sejtkoncentráció értékre beállítva állítottuk elő. A sejt szuszpenzíót Linbro 24 güjtőlemezekcn oszlattuk szét; 1 ml/1 20 gyűjtő. A lemezeket közel 48 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten, 5%-os COz atmoszférában inkubéltuk. Ez idő alatt - vizsgálandó vegyületeket - a megfelelő koncentrációban adtuk. A primer vizsgálatban mindegyik 25 gyűjtőbe a 200 pg/ml törzsoldatból 5 pl-1 adagoltunk. A titrálésos vizsgálat során a megfelelő hígításból 10 pl mennyiséget adagoltunk mindegyik gyűjtőbe. A lemezeket további 60-G5 órán keresztül 37 °C hőmérsék- 30 létén 5%-os COz atmoszférában reinkubáltuk. A vizsgálat során kntionos felületaktív szerek, jégecct és nátriumhidroxíd keverékének alkalmazásával sejl-llzist idéztünk elő. Mindegyik gyűjtőből a lizúlt sejt szuszpenzió 35 2 ml-ét 8 mi térfogatú hlgíLószerhez adtuk. Mindegyik mintát ZBÍ típusú Coulter számlá;ón vizsgáltuk. Az egyes minták aktivitását a kontrollok százalékában mértük, az adatokat LDm értékben adtuk meg, mely érték a vizs- 40 gált vegyület azonos moláris mennyisége, amely a tumor sejtek 50%-ának elpusztításához szükséges. Fentiek szerint eljárva a találmány szerinti, vizsgált vegyületekre az alábbi eredményeket 45 kap túli. Z -NHY LDm Mól-(CHzizNIÍlz ' -NIl(Cllz)zNEtz ' 2.2 x 10'7 .2I1C1-(OIIz)zNEtz -NH(CHz)zNH(CIlz)z01I 9.3 x lO'8 ■ 211C1 G
