195826. lajstromszámú szabadalom • Eljárás olaj és/vagy foszfatidil-etanol-amin elválasztására az ilyeneket tartalmazó, alkoholos foszfatidil-kolin termékekből, tiszta foszfatidil-kolin előállítására
2 195826 3 A találmány tárgya új eljárás, amelynek segítségével olaj és/vagy foszfatidil-etanol-amin különíthető el az ezeket tartalmazó, alkoholban oldódó foszfatidil-kolin-termékekből, nagytisztaságú foszfatidil-kolin kinyerése mellett, kovasavgélen végzett kromatografálás útján. Az étolaj előállításnál keletkező növényi nyersfoszfatidok foszfatidil-kolin mellett, foszfatidil-etanol-amint és mono-, di- és triglicerideket (olaj), valamint foszfatidil-inozitot, valamint má8 foszfortartalmú glicerinésztert, illetve anyagokat, így peptideket, aminosavakat, sztearint, sztearinsavésztert, szabad zsírsavakat és Bzénhidrát-származékokat tartalmaznak. A gyógyszeripari alkalmazás különösen olaj-mentes és foazfatidil-etanol-amin-mentes, nagytisztaságú foszfatidil-kolint igényel. A nyersfoszfatidokban lévő kÍBÓrőanyagok elkülönítésére már több eljárást ismertettek. Ezeknél első lépésként a növényi nyerBfoszfatidot acetonban olajmentesítik (lásd 1 053 299 Bzámú német szövetségi köztársaságbeli közzétételi irat, 3 268 335 számú amerikai szabadalmi leírás, 1 047 597 számú német szövetségi köztárBaságbeli közzétételi irat) és második lépésben etanollal extrahálják (lásd 2 724 649 számú amerikai szabadalmi leírás). A harmadik lépésben az etanolos foszfatid-frakciót oszlop-kroraatografálják, amely műveletet 35 ®C-nál alacsonyabb hőmérsékleten hajtanak végre (lásd 3 031 478 számú amerikai szabadalmi leírás). Az acetonos olajtalanításnál kis mennyiségben acetonsorba tartozó termékek, így mezitil-oxid, diaceton-alkohol és foron keletkeznek többek között. Ezeknek a mérgező és Bajátos szaguk miatt zavaró hatású anyagoknak az eltávolítása nagy ráfordítást igényel, sőt, részben nem is valósítható meg. Ezenkívül az acetonos olajmentesítés a peroxidok mennyiségének emelkedésével jár együtt, amelyeknek hátrányos fiziológiai hatásai közismertek. A növényi nyersfoszfatidok alkoholos exlrahálása olajtartalmú foszfatid-frakcióhoz vezet (lásd 2 718 797 számú német szövetségi köztársaságbeli nyilvánosságrahozatali irat, 1 492 952 számú német szövetségi köztársaságban szabadalmi leírás, 1 692 568 számú német szövetségi kőztársaságbeli közzétételi irat), amelyből szobahőmérsékleten végzett kromatografálás után olajtartalmú, foszfatidil-etanol-amintól mentes foszfatidil-kolin nyerhető. Saját szabadalmi bejelentésünk (P 3 023 814.3) szerinti megoldás alapján sikerült kis mennyiségű víz hozzáadásával az olajat leválasztani és nagytisztaságú, olajmentes foszfatidil-kolint kapni. Összességében azonban ez a vizes olajmentesítés, ami bizonyos foszfatid-frakciók előállítására jól alkalmazható, olajmentes foszfatidil-kolin kinyerésénél háromlépcsős folyamatot (extrahálás, kromatografálás, olajmentesítós) igényel, amelyet még bonyolultabbá tesz, hogy vizes etanol oldatokat kell feldolgozni. Tiszta foszfatidil-kolin kinyerésének feltétele az etanolban oldható foszfatidfrakcióban lévő klséróanyagok kromatográfiás úton való elkülönítése. Adszorbensként lényegében aluminium-oxidot használnak. A tisztítás mind oszlopkromatográfiásan, mind az elválasztó anyaggal való összekeveréssel történik, minden esetben szobahőmérsékleten. Üzemi méretekben bázikus alumínium-oxidot használnak. Ebben az esetben is mindig szhobahómérBékleten végzik a kromatografálást. Tekintve, hogy az aluminium-oxid kromatografálás után bevonódik a szennyeződésekkel, különösen a foszfatidil-etanol-aminnal, többé nem lehet felhasználni. További hátrány az, hogy a kromatografálás során lizofoszfatidil-kolin keletkezik [0. Renkonen, J. Lipid. Res. 3 181-3 (1962), D. Van Damme et al., Int. Symp. Chromatogr. Elektrophoresis, 5 th, 1968 (Pub. 1969), 268-781. A kovasavgéles kromatografálásnak eddig csak analitikai és preparatlv jelentősége volt. így pl. foszfatidokat hexánoldatban a kovasavgél nem adszorbeált (lásd 77 012 202 számú japán szabadalmi leírás, 3 869 482 Bzámú amerikai szabadalmi leírás), míg alkoholos oldatból visszatartott [H. Richter et al., Pharmazie 1977.32 (3), 164]. A különböző magatartás lipofil, polimolekulás foszfatid-micellák keletkezésével magyarázható meg hexán esetében, míg alkoholos oldatban a jelenlevő foszfatidok molekulárisak. A kromatografálást itt is szobahőmérsékleten végzik. A foszfatidok szétválasztása és szelektív deBZorbeáltatásn alkoholos foszfatidoldatok esetében alkohol/ammónium-hidroxid (49 093 400 számú japán szabadalmi leírás) vagy klorofom/metanol keverék alkalmazásával [C. H. Lea et al., Biochem. J., 60, 353-63. (1965)), illetve kloroform/metanol/víz keverékkel (79.916 számú német demokratikus köztársaságbeli szabadalmi leírás) történhet. Ennek az eljárásmódnak eddig nem volt műszaki jelentősége, mert eluálószerként mindig mérgező anyagok - Így ammónium-hidroxid vagy kloroform - keveréknél kellett használni, melyeknek visz- 8zanyerése és eltávolítása a lecitinból nagyon költséges. A kereskedelmi forgalomban kapható foBzfatidil-kolin-nyerstermékek, különösen a szójabab-foszfatidokból származók, alkoholos extrahálással nyert termékek, amelyek alkoholban oldódnak és foszfatidil-etanol-amint tartalmaznak főszennyezésként. Vannak azonban olyan foBzfatidil-kolin-nyerstermékek is, amelyek, mint leírják, csak az egyiket vagy a másikat tartalmazzák a kél fő szennyezés közül. Jelen találmány céljául tűzte ki olyan eljárás kidolgozását, amellyel olaj és/vagy foszfatidil-etanol-amin különíthető el az ezeket tartalmazó, alkoholban oldódó foszfatidil-kolin-termékekból, nagytisztaságú, olyan 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
