195826. lajstromszámú szabadalom • Eljárás olaj és/vagy foszfatidil-etanol-amin elválasztására az ilyeneket tartalmazó, alkoholos foszfatidil-kolin termékekből, tiszta foszfatidil-kolin előállítására
4 195826 5 foszfatidil-kolin termékek előállítása mellett, amelyek ezen szennyeződésektől mentesek. Minden, eddig ismert eljárásnak az volt a hátránya, hogy tÍBzta, olajtól és foszfalidil-elanol-amintól mentes termék előállítása körülményes eljárási lépéseket igényel, amelyeknél számolni kellett mérgező termékek képződésével vagy visszamaradásával. Továbbá, a kromatografálással végzett tisztításnál felhasznált alumínium-oxid a továbbiakban már nem volt használható. Azt tapasztaltuk, hogy az alkoholban oldódó, olaj és/vagy foszfatidil-etanol-amin tartalmú foszfatid frakciókból kovasavgéles oszlop-kromatografálása, magasabb hőmérsékleten olaj- és foszfatidil-etanol-amin-mentes, nagytisztaságú foszfatidil-kolin nyerhető. A találmány szerinti eljárást, mely olaj és/vagy foszfatidil-etanol-amin elkülönítésére szolgál ezeket tartalmazó, alkoholban oldódó foszfatidil-kolin-termékekből, olaj- és foszfatidil-etanol-amin-mentes foszfatidil-kolin előállítása mellett, az jellemzi, hogy az olajés/vagy foszfatidil-etanol-amin-tartalmú, alkoholban oldódó foszfatidil-kolin-termék 1-4 szénatomos alkanolos, adott esetben 15 térfogatszázalékig terjedő mennyiségű vízzel őszszekevert oldatát, 40-90 ®C tartományú hőmérsékleten kovasavgél-oszlopra visszük, az oszlopot ezen a hőmérsékleten adott esetben 15 térfogatszázalékig terjedő mennyiségű vizel tartalmazó 1-4 Bzénatomos alkanollal eluáljuk és ennek során az elkülöníthető olajat és/vagy foszfatidil-etanol-amint tartalmazó előfrakciót és ettől elkülönítve a tiszta foszfatidil-kolint tartalmazó maradék frakciót összegyűjtjük és a maradék frakcióból az oldószert eltávolítjuk. A kovasavgél-oszlopra való felvitelt és az eluálást 65-90 ®C hőmérséklettartományban, különösen előnyösen 65-70 °C-on végezzük. Eluálószerként előnyösen az alkalmazott oldószert használjuk, ami különösen egyszerűvé teszi az eljárást. A legelőnyösebb 1-4 szénatomos alkanol az elanol. Az előfrakció mennyisége függ az alkalmazott foszfatidil-kolin-terraéktől. Egyszerű elemzési módszerrel meg lehet állapítani, hogy az eluátum mikortól kezdődően mentes az elkülönítendő termékektől és mikor tartalmaz gyakorlatilag már csak foszfatidil-kolint. Tapasztalataink szerint az előfrakciót az eluátum össztérfogatának mintegy 20-25%-át teszi ki. Az előfrakcióban az alkalmazott foszfatidil-kolin-terméktól függően, megtalálhatók a szokásosan előforduló egyéb kísérőanyagok is, így a szterinek, szterinszármazékok, gliko-lipidek és foszfolipidek, amelyek továbbfeldolgozásra kerülhetnek. Kovasavgélként a kroroatografáláshoz szokásos termékeket használhatjuk, különböző szemcse nagyságú vagy sajtolt kovasavgélt is, mely aktivált vagy dezaktivált lehet. Előnyösen semleges kovasavgélt használunk. A találmány szerinti eljárás normál nyomáson végezhető. A találmány szerinti eljárás külön előnye, hogy a kovasavgélt a kromatografálás után újra fel lehet használni. Az összes szennyeződést az előfrakcióval fel fogjuk; a főfrakció után már csak kis raenynyiségű foszfatidil-kolin marad vissza. További előnye a kovasavgélnek az adszorpcióé anyag nagy terhelhetősége. így oszlop-kromatografálás szétválasztásánál 100 rész kovasavgéllel körülbelül 60 rész szilárd anyagot lehet az alkoholos foszfatid-frakcióból elkülöníteni. Foszfatidil-kolin-terraékként például szója, földimogyoró, napraforgómag vagy repce alkoholos kivonata szolgálhat. A foszfatidot rövidszénláncú alifás alkohollal, például metanollal, etanollal, n-propanollal vagy izopropanollal, célszerűen azonban 94-96%-os etanollal oldjuk. Az oldatot üledék-mentesitjük és a tiszta alkohol-fázist úgy, amint van, vagy koncentrátum alakjában használjuk a találmány szerinti eljárásnál. Az extrakcióhoz használt oldószert teljes egészében eltávolíthatjuk és a kapott terméket ismét feloldjuk egy vagy több, adott esetben legfeljebb 20 tf% vizet tartalmazó 1-4 szénatomos alkanolban. Tiszta foszfatidil-kolin kinyerése mind olajat, mind pedig foszfatidil-etanol-amint tartalmazó ÍOBzfatidil-kolin nyerstermékből egyszerűbbé vált az ismert megoldásokhoz képest azáltal, hogy az olajmentesítés és tisztítás eljárási lépéseit összevontuk. További előny - mely olyan foszfatidil-kolin termékek felhasználásánál is jelentkezik, melyekből a két szennyező anyag egyikét más módszerrel már kivontuk - az, hogy a kovasav-gél ismételten felhasználható. Példák Analízis A foszfalidokat vékonyréteg-kromatográfiás úton elemezzük. Az olajtartalmat egyenlőnek vettük a dializálhatókkal. A vizel Karl Fischer szerint, a maradék etanoltartalmat gázkromatográfiás analízissel határoztuk meg. Oszlop-kromatografálás Kettős köpenyű kromatografáló oszlopot (belső átmérő 4,5 cm, magasság 37 cm) használunk. Az oszlop elé hőcserélőt kapcsolunk, hogy az oszlop és a felhordás hőmérsékletét egyenlővé tudjuk tenni. Az oszlopot 200 g kovasavgélnek (Merck) a mindenkori oldószerrel készített szuszpenziójával töltjük meg. A kromatografálás után a kovasavgélt újra felhasználhatjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
