195799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-dezmetil-mevalonsav származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények és a hatóanyagok előállítására
7 195799 8 platina, PtOi vagy PdOi jelenlétében a (I) általános képletű vegyületté hidrogénezzük - a (I) általános képletben A-B jelentése -CHj-CHi-csoport. A hidrogénezést normál nyomáson, szokás szerinti oldószerben, igy például tetrahidrofuránban, ecet-éBzterben, metanolban, kis molekulájú alkoholokban, jégecetben, kloroformban végezzük, vagy autoklávban dolgozunk 2-50.10* Pa-ra növelt nyomáson. Az ily módon előállított (I) általános képletű vegyületeket egyszerű módon, oldószer bepárlással izoláljuk, adott esetben kromatográfiásan tisztítjuk. A (I) általános képletű vegyületek optikailag tiszta formában keletkeznek. A kettőskötés konfigurációját tekintve a (A-B jelentése -CH = CH- csoport), az E = Z elegyet kapjuk meg. Ezt az elegyet kromatográfiásan szétválaszthatjuk, vagy az E-formává izomerizálhatjuk [De Tar és munkatársai, J. Amer. Chem. Soc. 78, 475 (1955)]. A (I) általános képletű vegyületeket í-lakton formában a dihidroxisavak megfelelő sójává szappanosíthatjuk lúgos közegben, igy például kismolekulájú alkoholokban igy metanolban vagy éterben, igy például dimetoxi-etánban vagy tetrahidrofuránban, adott esetben víz jelenlétében nátrium-hidroxiddal vagy káliura-hidroxiddal átalakíthatjuk. Az ily módon keletkezett dihidroxi-savak sóiban az alkáli-kationt megsavanyítás után ioncserélőben szokásos módon tetszés szerinti kationra cserélhetjük. Ebben az esetben például a dihidroxi-Bavat egy kationcserélővei, például polisztirol/divinil benzollal ((R) Amberlite CG-150 vagy (R) Do-wex-CCR-2) töltött oszlopon futtatjuk. A kationcserélőt a kívánt kationnal terheljük, igy például ammónium-ionnal, amely az primer, szekunder vagy tercier aminból levezethető. A kivánt sót az eluátum bepárlása utón kapjuk meg. A primer, szekunder vagy tercier aminból levezethető dihidroxisavak ammóniumsóit úgy is előállíthatjuk, hogy a szabad dihidroxisavat alkoholos oldatban a megfelelő amin ekvimoláris mennyiségével összekeverjük, és az oldószert lepároljuk. A (la) (I) általános képletű í-lakton (la) szabad dihidroxi-savait szokásos módon, igy például diazo-alkánnal észteresíthetjük. így például a (I) általános képletű vegyületet, amelynek képletében R jelentése hidrogénalom, -40 - 20 ®C hőmérsékleten diazo-alkánnal észteresíthetjük, amikoris szokás szerint alkalmazott oldószert, így például dietil-éterl, tetrahidrofurán, kloroformot vagy kis molekulájú alkoholt, igy például metanolt alkalmazunk. A keletkezett észtert egyszerű módon az oldószer bepárlásával izoláljuk, és adott esetben kromatográfiás úton tisztítjuk. Egy másik észteresitési módszer szerint a (la) általános képletű dihidroxisav sóját bázis jelenlétében, igy például fém-alkoholát vagy fém-karbonát jelenlétében megfelelő oldószerben, alkilezószerrel átalakíthatjuk. Fém-alkoholátként alkalmazhatunk például nátrium-metilátot, nátrium-etilátot vagy kálium-tercier-butilátot. Oldószerként megfelelő például alkohol, igy például metanol vagy terc-bulanol, éter, igy például tetrahidrofurán vagy 1,2-dimetoxi-etán és különösen dipoláris aprotikus oldószerek, igy például dimetil-formamid, dimetil-szulfoxid, acetonitril vagy N-metil-pirrolidon. A dihidroxisavak észteresitését elvégezhetjük úgy is, hogy az észteresítést alkohol, igy például metanol, etanol, izopropanol felesleggel végezzük. Amennyiben az egyes reakciótermékek nem olyan tiszta formában keletkeznek, hogy azokat a következő reakciólépésben alkalmazhatnánk, akkor ajánlatos ezeket átkristályositással, oszlop- vagy rétegkromatográfiával vagy nagynyomású folyadékkromatogrófiával tisztítani. Amennyiben a (III) általános képletű aldehidek nem tiszta enantiomer formában keletkeznek, akkor az enantiomer végtermék keveréket szokásos eljárással szétválasztjuk. Biológiai vizsgálati rendszerek: 1. Enzim készítményekben mért HMG--CoA-reduktáz-aktivitás Patkánymáj mikroszómából előállított enzim készítmény oldatát használtuk HMG-CoA-reduktáz-aktivitás mérésére. Az aktivitás előidézésére koleszterin-amint használtunk (Cuemid), miután a nap-éjszaka ritmust beállítottuk. Szubsztrátként az (S,R) 14C-HMG-CoA-t alkalmaztuk, az NADPH-koncentrációját az inkubálás során regeneráló rendszerrel biztosítottuk. A szubsztráttól a MC-Mevalonát és egyéb termékek (igy például UC-HMG) elválasztását oszlopos elúcióval végeztük, amikoris minden egyes minta elúciós profilját megadtuk. 3H-Mevalonát állandó nyomonkövetését nem végeztük, mivel a meghatározásnál a gátló hatás relatív megadásáról van szó. Egy kísérleti sorozatban az enzimmentes kontrollt, az enzimtartalmú normál összetételt (= 100%) és ezeknek 10'5 - 10'® mól koncentrációban készítményt tartalmazó rendszereit együttesen vizsgáltuk. Minden egyes értéket a három párhuzamos minta középértékéből számítottuk. A készítménymentes és a készítményt tartalmazó minták között keletkező középérték-különbség szignifikánsát a t-vizsgálat alapján határoztuk meg. Az itt leírt módszer alapján a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeknek a HMG-CoA-reduktázra kifejteit gátló értékeit az 1. táblázatban közöljük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
