195799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-dezmetil-mevalonsav származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények és a hatóanyagok előállítására

1. táblázat

Példa

sorszám

R1

RJ

R3

ICso-érték (M)

16

g

4-fluor-fenil

H

H

etilén

9,0

X

10-’

16

j

ciklohexil

H

H

metilén

9,0

X

10-*

16

1

4-klór-fenil

H

H

metilén

8,0

X

10-’

16

y

4-klór-fenil

o-metil

H

metilén

2,8

X

10-*

16

Z

ciklohexil

o-klór

P•klór

metilén

1,9

X

10-«

16

U

ciklohexil

o-metil

H

etilén

6,5

X

io-7

16

ab

4-klór-fenil

o-klór

H

metilén

2,3

X

10-7

16

ac

ciklohexil

o-klór

H

metilén

7,1

X

10-*

2.

Fibrolasl sejtkultúrékban

mért HMG-tot

[3H]-mevalon

laktonna

torteno • ciKiizaia-CoA-reduktáz

gátlása

szuppriniálása illetve

Lipoproteinmentes tápkőzegben meghatározott ideig, például 3 órán keresztül megfelelő vizsgálati anyag koncentrációval kezeltünk fibroblaszt (L-sejtek) mono rétegeit. Ezután a sejtek HMG-CoA-reduktáz aktivitását Chang és mtársai [J. Bioi. Chem. 256, 6174 (1981)] szerinti módszerrel meghatároztuk. A meghatározásban a sejtextraktumot D,L[3H]-HMGCoA-val inkubáltuk, és a sejtekben a jelenlevő HMG-CoA-reduktáz-aktivitás hatására képződő terméket, a [3H]-mevaloná-20

25

30

után rétegkromatográfiésan elválasztottuk a kiindulási terméktől, és a sejtegységben képződő [3H]-mevalonátot a sejtprotein mennyiségére vonatkoztatva egy közbenső standardnak a [14C]-mevalonátnak az alkalmazásával meghatároztuk. Vizsgálati készítmény meghatározott koncentrációjának az adagolásával megállapítottuk a sejtkultúra HMG-CoA-reduktáz aktivitást egy hasonló módon, de a vizsgálati készítmény nélkül, azonban azonos oldószerkoncentrációjú sejtkultúra esetében mért aktivitás %-ában fejeztük ki.

Hatóanyagoknak a HMG-CoA-reduktáz gátlására kifejtett hatásának vizsgálata sejtkultúrában A HEP-G2-sejtek

fúziós sejtkultúrája (mono-réteg)

1.) lipoproteinmentes közeg (DMEM)

2.) Vizsgálati készítménnyek végzett inkubálás

3.) citolizis

4.) a sejt-lizátokban lévő reduktázok aktiválása

5.) a sejt-lizátok inkubélása D,L-(3H)-HMG-CoA-val

6.) a reakció leállítása és a reakciótermék ciklizálása

7.) A (3H)-Mevalonlakton

reakciótermék rétegkromatográfiés elválasztása

8.) A (3H)-Mevalonlakton izolálása

9.) A D,L-(3H)-HMG-CoA-nak a (3H)-MevBlonlakton-hoz viszonyított konverziós rátájának számolása és szcintillációs mérése

10. Eredmény:

nmol (3H)-Mevalonat/mg sejtprotein-ben az oldószer-kontrollal összehasonlítás

24 óra

3 óra

10

perc

1

óra

*

cr (0

0

1

*—>

m

O*

2

0)

1

óra

<

5T

HL

3

o'

a

3

Q>cw

*1

a

1

óra

•0

0

3

I

3

m

on

sr

09

r*BK

*1

o

N

03