195734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás herpes simplex vírus elleni védőanyagok előállítására
23 195734 24 1. TÁBLÁZAT Az alkalmazott vírus A szükséges gD-koncentráció® gD-1 gD-2 HSV-1 37 HSV-2 35 BA gD-nek az a nanogrammban kifejezett mennyisége, amely szükséges ahhoz, hogy 5054-ban gátolja a CP-1 elleni szérum 30 p.f.u. HSV-l-et vagy HSV-2-t közömbösítő képességét. A következő példa igazolja a találmány szerinti gD-1 vakcinakészitmény hatásosságát olyan, vakcináit állatok megvédésében, amelynek halálos adagban HSV-l-et és HSV-2 vírust adagoltunk. 4. példa Inokulumként 1 mikrogramm gD-1 Freund-féle teljes adjuvánssal készült oldata szolgált. A gD-1 anyagot a 2. példa szerint HF HSV-1 törzzsel fertőzött sejtek citoplazmájából különítettük el. Az első, oltott csoportban minden egyes Balb/c egérnek összesen 5 intraperitoneális befecskendezést adtunk 2 hónapos időtartam alatt. Az utolsó oltás után 7 nappal a plexus retro-orbitalis-ból vett vér szérumán IÎIP mérést végeztünk Eisenberg és munkatársai módszerével [J. Virol. 31, 608 (1979)], valamint az antitest-közömbösitési módszerrel, Cohen és munkatársai szerint [J. Virol. 19, 1021 (1972)]. Az összes immunizált állatok pozitívan válaszoltak: antitest-közömbösitő titerük körülbelül 1:16-tól körülbelül 1:128-ig terjedt, és az immunkicsapás eredményei csupán gD elleni antitestek képződésére utaltak. Mivel az antitest mind a gD-l-et, mind a gD-2- -t immunkicsapásos reakcióba vitte, nyilvánvaló volt, hogy mind a 10 vakcináit állat a IISV gD elleni, típusra vonatkozóan közös, közömbösítő antitestet fejlesztett ki. Az utolsó oltás után 14 nappal felállítottuk az első, 10 vakcináit egérből álló csoportot, amelyek különböző szintű szérum-közömbösitő antitest-titerekkel rendelkeztek (3 állatnál körülbelül 1:128; 3 állatnál körülbelül 1:64; és 4 állatnál körülbelül 1:32). Ezt a 10 egeret 9 kontroll (nem vakcináit) egérrel együtt intraperitoneálisan 4xl06 p.f.u. Pat- Lon-törzshöz tartozó HSV-1 vírussal fertőztük (ez megközelitóleg az LDso érték négyszerese e törzsre vonatkozóan). Az összes kontrollállatok elhullottak 7 napon belül, viszont valamennyi vakcináit állat hosszú időn át túlélte a fertőzést, és egyáltalában nem mutatott rendellenességet. nem határoztuk meg 30 Egy második csoportot álUtottunk fel 8 vakcináit egérből, amelyek szérum-közömbófcitő antitest-titere 1:16-tól 1:128-ig terjedt. Minden egyes állatnak további 1 mikrogramm gD-1 adagot adtunk. Ezeket az állatokat - 11 kontroll egérrel együttesen - lxlO6 p.f.u. 186-törzshöz tartozó HSV-2-vel intraperitoneálisan fertőztük. Tiz napon belül a 11 kontrollállat közül 8 elhullott, a megmaradó 3 kontroll túlélte a fertőzést, és később leöltük. Az összes vakcináit állatok egészségesek maradtak, és nem mutattak neurológiai rendellenességet (például extrém nyugalmi állapotot), amely az intraperitoneális HSV adagolás következménye. Az alábbi példa mutatja a találmány szerinti gD-1 vakcinakészitények hatékonyságát a közömbösitő antitestek képződésének stimulálásában. 5. példa Ebben a kísérletünkben 4 nyulat alkalmaztunk. A két vakcináit állat némileg különböző 2. példa szerinti gD-1 és gD-2 adagot kapott intramuszkulárisan, amely Freund-féle adjuvánssal volt kiegészítve. Az első, gD-1- vel vakcináit állat összesen négy adagot kapott: 10, 10, 5 és 4,5 mikrogramm gD-2-t kapott ugyanilyen időtartam alatt. Mindkét állatnak .lökésszerűen' 1 mikrogramm gD-l-et adagoltunk megközelítőleg 10 nappal később, és ezután 3 nappal mindkét állatot elvéreztettük. Az összegyűjtött vérszérumon szérum- közömbösítő antitest-meghatározásokat végeztünk. A kapott eredmények megközelítőleg 3-5-ször magasabbak voltak, mint a kromatográfiásan tisztított CP-1 készítmény alkalmazásával kapott eredmények [Cohen és munkatársai, J. Virol. 27, 172 (1978)]. Az idézet szerinti CP-1 készítmény a legmagasabb mértékben tisztított, legaktívabb glikoprotein gD készítmény volt, amelyet a technika jelenlegi állása szerint, találmányunk előtt ismerlek. Jóllehet kontrollált kísérleti vizsgálattal nem igazoltuk, a találmány szerinti vakcinákkal védőhatáson túlmenő hatások is elérhetők clyan kóros állapotokkal szemben, amelyek a vakcinálás utáni fertőzésből erednek. E hatás a ganglionos fertőzés korlátozásában mutat-15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
