195733. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szövet plazminogén aktivátor és ezt hatónyagként tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
6 195733 7 vizes oldat könnyen beállítható a kívánt pH-értékre fiziológiailag alkalmazható szervetlen vagy szerves savak segítségével. Előnyösen alkalmazható savak a hidrogénklorid, kénsav és salétromsav, valamint a citromsav, borkősav és benzolszulfonsav, elsősorban a hidrogénklorid. A viz mellett egyéb oldószerek és adalékok is felhasználhatók, előnyösebb azonban, ha a közeg teljes egészében vagy legalább főtömegében víz. A liofilizált gyógyszerkészítményekből nyert parenterális oldat a beteg vérszérumához képest lehet hipertónikus, hipotónikus vagy izotónikus. Nemkívánatos mellékhatások elkerülése érdekében célszerű, ha a parenterális oldat izotónikus, bár csekély eltérések nem okoznak fiziológiai következményeket. Lényegében izotónikus parenterális oldat nyerhető olyan, fiziológiailag alkalmazható szer segítségével, amely a kívánt szintre növeli az oldat tónikusságát. Ez a szer már a fagyasztva szárított vizes oldatba Letehető, és igy a liofilizált gyógyszerkészítményben már benne van, vagy hozzáadható a semleges vagy savas pH-jú vízhez, amelyet a kívánt parenterális oldat előállításához használunk. Ebből a célból bármely ismert szer felhasználható, így a dextróz (vízmentes vagy monohidrát formában), a ' nátriumklorid vagy ezek keveréke. A szer koncentrációját a vizes oldatban vagy a feloldáshoz alkalmazott vízben, a felhasznált szer fajtája határozza meg. Nátriumklorid esetében a koncentráció általában 7-10 mg/ml, előnyösen mintegy 8,5 mg/ml, amit általában fiziológiás só koncentrációnak neveznek. Vízmentes dextróz esetében a koncentráció általában 30- -70 mg/ml, előnyösen mintegy 50 mg/ml. A vizes oldat bármely olyan adalékanyagot tartalmazhat, amelyek hasonló liofilizált gyógyszerkészítményekben szokásosak. Példaként említhető a humán szérum albumin, valamint kötőanyagok, töltőanyagok, így mannitol, laktóz és glükóz. Mivel a t-PA hajlamos arra, hogy üveg és műanyag felületeket adszorbeáljon, célszerű olyan felületaktív anyag alkalmazása, amely gátolja vagy csökkenti ezt az adszorpciót. Előnyösen alkalmazható felületaktív anyagok a zsírsav-szorbitánészterek polioxietilénszármazékai, például Tween 80. A találmány szerinti eljárás egyik meglepő hatása a t-PA oldékonyságának növelése mellett, hogy a liofilizált gyógyszerkészítmény feloldásával nyert savas parenterális oldat alkalmazása a betegnél nem vált ki fiziológiai hatást. Úgy tűnik, hogy a véráram képes arra, hogy az oldat pH-ját szinte az adagolással egyidejűleg semlegesítse, és a t-PA-t az áramban eloszlassa. Előnyös, ha ezt a folyamatot nem gátoljuk, vagyis ha a parenterális oldat, a fagyasztva szárított vizes oldat vagy a liofilizátum feloldására használt oldat nem tartalmaz erős puffer anyagot. Gyenge puffer anyag azonban, amely nem lassítja lényegesen a fenti folyamatot, felhasználható, sőt a savas pH-jú t-PA is saját gyenge pufferjeként működik még a humán szérum albumin is. Mivel a t-PA oldékonysága a pH = 2-5 taitományban jelentős mértékben megnő, elkerülhető, hogy a liofilizált gyógyszerkészítményből nyert parenterális oldat különböző segédanyagokat, igy lizint, ornitint vagy ezek sóját tartalmazza a t-PA oldékonyságának fokozására. A t-PA vizes oldata előállítható úgy, hogy a tisztított t-PA-t feloldjuk, majd az oldószert 2-5 pH-értékű vízre cseréljük, vagy a tisztított t-PA-t 2-5 pH-értékű vizes közegben oldjuk. A t-PA tisztítása megvalósítható úgy is, hogy a fehérjét kromatográfiás oszlopon eluáljuk erős puffert tartalmazó oldat formájában. Mint említettük, előnyös, ha a parenterális oldat, a liofilizált gyógyszerkészítmény és a vizes oldat nem tartalmaz ex’ős puffer anyagot, így elválasztásénak egyik előnyös módja, ha a közeget dialízis segítségével lecseréljük. Ez megvalósítható dialízis csővel vagy művesével amelyben a tisztított oldatot pH = 2-5 vizes közeggel dializáljuk. Előnyös, ha a tisztított oldat t-PA koncentrációja olyan magas, hogy a pH-érték 2-5 közé essen. Az erős puffer anyag a közeg lecserélésével eltávolítható úgy is, hogy a tisztított oldatot gélszűrés után pH = 2-5 vizes Közeggel oszlopra visszük fel. A tisztított oldatból szilárd formában kicsapható a t-PA, ha a pH-értéket 5,5-re állítjuk, az oldatot fagyásponthoz közeli hőmérsékletig hűtjük, majd a fehérjét például ce itrifugálással eltávolítjuk. A kicsapott szilárd anyag ezután pH = 2-5 vizes közegben szokásos módon oldható. A kapott vizes oldatot a szokásos módon, így szűréssel sterilizáljuk, és mintegy 0,5-20 ml térfogatú steril műanyag vagy üveg edényekbe, így ampullákba vagy fiolákba töltjük. A t-PA vizes oldatát előnyösen -10 °C és -40 "°C között fagyasztjuk. A fagyasztott vizes oldatot ezen a hőmérsékleten tartjuk a vákuum szárítás megkezdéséig. A fagyasztott vizes oldat vákuum szárítását a szokásos módon, teljes vagy részleges vákuum alatt végezzük, például 0,01-0,1 Torr nyomáson a fagyasztott folyadék lényegében teljes eltávolításához szükséges ideig. A vákuum szárítás hőmérséklete a folyamit kezdetén általában -30 °C és -40 °C között van, vagyis a vizes oldat lényegében vagy teljesen fagyott állapotban van. A folyamat előrehaladtával és a víz eltávolításával a hőmérséklet fokozatosan szobahőmérsékletig emelhető. A viz utolsó nyomainak eltávolításához a szárítást előnyösen szobahőmérsékle-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
