195540. lajstromszámú szabadalom • Eljárás G- és V-penicillin előállítására fermentációs úton
1 195 540 2 A rendszerhez steril vizet is adagoltunk olyan ütemben, hogy a fcrmcntlé aktivitása ne haladja meg a Feldolgozás szempontjából már nem előnyős 25 000 E/ml értéket. Amikor a fermentlé térfogata elérte a 850 litert, a rendszerből 50 liter fermentlevet leeresztettünk. Ezt a folyamatot a fermentáció oltásától kezdődően 200 órán keresztül folytattuk. A fentiekben jellemzett eljárás kivitelezésére alkalmazott fermentor teljes kapacitása 1150 liter, hasznos kapacitása 850 liter volt. Eljárásunkkal a fentiek szerint nyert adatok alapján számítva: ' 1 m3 teljes fermentortérfogatban 1 hónap alatt 81,7 kg G-penicillin-K-só volt bioszintctizálható. A kinyert termék hatóanyagtartalma (HPLC): 99,2%. Op.: 214-216 °C (bomlik). 1 kg penicillin bioszintetizálásához 5,43 kg szaharózt, 0,35 kg ammóniumszulfátot, 0,51 kg fenilecetsavat, 1,02 kg kukoricalekvárt (100%), 0,4 2 kg (földi) mogyorólisztet használtunk fel. 4. példa A BIOGAL Gyógyszergyár tulajdonában lévő ipari termelésre alkalmazott URC M jelzésű Pénicillium chrysogenum törzsből (deponálási szám: MNG-00237) 80 liter előfermentációt készítettünk. Az előfcrincntációt 720 liter alaptáptalajba oltottuk, melynek összetétele a következő volt: (földi) mogyoróliszt 1,0 t.% kukoricalekvár (100% szárazanyagtartalomra) 2,5 t.% nátriumtioszulfát 0,1751.% kalciumkarbonát 0,681.% napraforgóolaj 0,251.% fenoxiecetsav 0,561.%. A fermentációs paraméterek a következők voltak: L/tUHUlVVVIVn a « felhasznált energia 800 liter fermentlé térfogatnál mérve hőmérséklet belső nyomás levegőztetés 2,6 kW/m3 25 °C 10s Pa 1 Nm3/1 m3 f A fermentáció 60 órás korától a fermentáció teljes lefutása alatt folyamatosan fenoxiecetsav oldatot adagoltunk. Az adagolást olyan ütemben végeztük, hogy a fenoxiecetsav koncentrációja 0,20-0,05 t.% értékek között maradjon. A pH szabályzására ammóniumszulfát, ammóniumhidroxid és káljumhidroxid oldatokat alkalmaztunk, úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy a pH 6,2—7,2 értékeken legyen, ugyanakkor az oldott nitrogéntartalom minimum 20 mg/100 ml értéket érjen cl. Szénforrásként a tenyészethez 50 t.%-os szaharózoldatol és napraforgóolajat adagoltunk. A napraforgóolaj adagolása olyan ütemben történt, hogy a tenyészet térfogata a levegőztetés nélküli térfogatot mintegy 15—25%-kal haladja meg. A szaharóz és napraforgóolaj együttes adagolási ütemét úgy választottuk meg, hogy a Fermentáció alatt a nedves sejttérfogat (PCV) érték 38—44 tf.% közöttiegyen. 5 A rendszerhez steril vizet is adagoltunk olyan ütemben, hogy a fermentlé aktivitása ne haladja meg a feldolgozás szempontjából már nem előnyös 25 000 E/ml értéket. Amikor a fermentlé térfogata elérte a 85Q litert, a 10 rendszerből 50 liter fermentlevet leeresztettünk. Ezt a folyamatot a fermentáció oltásától kezdődően 200 órán keresztül folytattuk. A fentiekben jellemzett eljárás kivitelezésére alkalmázott fermentor teljes kapacitása 1150 liter; hasznos kapacitása 850 liter volt. Eljárásunkkal a fentiek szerint nyert adatok alapján számítva: 1 m3 teljes fermentortérfogatban 2o 1 hónap alatt 89,2 kg V-pcnicillin-K-só volt bioszintetizálható. A kinyert termék hatóanyagtartalma (HPLC): 99,0%. [«]=f =219° (c = 0,2 vízben). 1 kg penicillin bioszintetizálásához 25 5,25 kg szaharózt, 0,38 kg ammóniumszulfátot, 0,70 kg fenoxiecetsavat, 0,94 kg kukoricalekvárt (100%), 0,38 kg (földi) mogyorólisztet 30 használtunk fel. 5. példa A BIOGAL Gyógyszergyár tulajdonában lévő ipari ter- 35 melésre alkalmazott URC M jelzésű Pénicillium chrysogenum törzsből (deponálási szám: MNG-00237) 80 liter előfermentációt készítettünk. Az előfermentációt 720 liter alaptáptalajba oltottuk, melynek összetétele a következő volt: 40 (földi) mogyoróliszt kukoricalekvár 1,01.% (100% szárazanyagtartalomra) 2,5 t.% nátriumtioszulfát 1,175 t.% kálciumkarbonát 0,681.% 45 napraforgóolaj 0,25 t.% fenoxiecetsav 0,56 t.% A fermentációs paraméterek a következők voltak: felhasznált energia 800 liter fermentlé térfogatnál mérve 2,6 kW/m3 hőmérséklet 25 °C belső nyomás 10s Pa levegőztetés 1 Nm3/1 m3 f.lé/perc A fermentáció 60 órás korától a fermentáció teljes lefutása alatt folyamatosan fenoxiecetsav oldatot adagoltunk. Az adagolást olyan ütemben végeztük, hogy a fenoxiecetsav koncentrációja 0,20—0,05 t.% érték köggZött maradjon. A pH szabályozására ammóniumszulfát és ammóniumhidroxid oldatokat alkalmaztunk, úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy a pH 6,2—7,0 értéken legyen, ugyanakkor az oldott nitrogén tartalom minimum 20 mg} 100 ml értéket érjen el. Szénforrásként a tenyé- 65 szethez 50 t.%-os szaharózoldatot és napraforgóolajat 4
