195536. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására
1 195 536 2 0,1 % kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,02% magnézium-szulfát-heptahidrátot és 0,5 % kalcium-karbonátot tartalmazó vizes oldat pH-ját 10%-os nátrium-hidroxid oldattal 6,8-7,0-re állítjuk,és 50 ml-es részletekre osztva 500 ml-es kúpos lombikokba töltjük. Az oltótáptalajt 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk. (ii) Oltó tenyészet: A lombikban lévő (i) oltó táptalajt egy kacsnyi, az 1. táblázatban feltüntetett Erwinia punctata FERM-P 5452-vel oltjuk be, és rázatás közben (71 mm amplitúdó 270 ford./perc) 28 °C-on 8—11 óra bosszúig iukubáljuk. Az oltó tenyészetet abban az időpontban állítjuk le, amikor optikai sűrűsége körülbelül 8-at ér el (végpont). (iii) Fermentációs táptalaj: 20% D-Glükózt, 3% kukoricalekvárt, 0,1 % kálium-dihidrogén-foszfátot, 6,3% kalcium-karbonátot és 0,01 % habzásgátló polipropilén-glikoít (P-2000) tartalmazó vizes oldat pH-ját 6,8-7,0-re állítjuk és 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk, majd 455 ml-es adagokat töltünk aszeptikusán 1 literes sterilizált fermentorba, és 45—45 ml fenti (ii) oltó tenyészetet adunk mindegyikhez. (ív) Fermentáció: A fermentációt 28 °C-on 600 Nml/perc levegő átvezetéssel és 1740 ford./perc keveréssel végezzük 20—30 óra hosszáig (a végső 2,5-diketo-D-glükonsav koncentráció körülbelül 19 súly/térf.%). A fermentlevet a sejtek eltávolítása céljából centrifugáljuk, és a felülúszót szűréssel sterilizáljuk. Ezt használjuk 2;5-diketo-D-glükonsav fermentléként. (v) Végpont: A fermentációt akkor állítjuk le, amikor a 2-keto-D- 5 gliikonsav piros foltja eltűnik a fermentlé vékonyrétegkrciuatogramjáról. B előállítási példa. (2,5-Diketo-D-glükonsav-kalciumsó oldata.) 10 5% porított 2,5-diketo-D-glükonsav-kalciurhsó oldásával készített 5,0%-os vizes oldatot sterilizálunk szűréssel. 2. példa. ^ ® [A (II) mutáns használata 2-keto-L-gulonsav fermentációval való termelésére.] (1) Oltó táptalaj. (Az összes következő példákban haszon nálatos). 1.0% D-Glükózl, 0,5 % Bacto élesztőkivonatotj(Difco), 0,5 % Bacto peptont (Difco), 0,1 % kálium-dihidrogén-foszfátot és 0,02% magnézium-szulfát heptahidrátot tartalmazó vizes oldat pH-ját 7—7,2-re állítjuk 10%-os nátrium-hidroxi oldattal. 50—50 ml-cs adagokat töltünk 500 ml-es kúpos lombikokba, és 115 °C-on 20 percig sterilezzük. 30 (2) Fermentációs táptalaj. 1,0% D-Glükózt, 3,0% kukoricalekvárt, 4. táblázat 2-Keto-L-gulonsav és a 2-keto-D-glükonsav felhalmozódás (mg/ml) olyan fermen Hevekben, amelyekben az (I) szülőtörzset, illetve (II) mutánst tenyésztettük. A meghatározás a tenyésztés kezdete után 48 órával történt. A 2,5-diketo- D-glükonsav 2-Keto-L-gulonsavat betáplálás 2,5-Diketo-D-glükonsav-kalciumsó FERM-P 5452, ATCC 31626 termelő mikro- ideje vizes oldata (szűréssel sterilizálva) fermentleve (szűréssel sterilizálva) organizmus törzsek a tenyésztés 2 KLG, mg/ml 2 KDG, mg/ml 2 KLG, mg/ml 2 KDG, mg/ml kezdete után (óra) Corynebacterium sp. 0 1,50 0,46 1,75 0,58 FERM-P 2770 ATCC No. 31090 16 3,85 1,38 4,10 1,45 5-Keto-D-glükonsav 0 5,20 0 5,33 0 metabolizmus hiánymutáns (FERM-BP 108) 16 7,30 0 8,20 0 Corynebacterium sp. 0 0,28 0,42 0,38 0,24 FERM-P 2687, ATCC No. 31081 16 0,70 0,70 0,73 0,68 5-Keto-D-glükonsav 0 0,25 0 0,40 0 metabolizmus hiány-16 0,83 0 0,86 0 mutáns (FERM-BP 107) 2 KLG: 2-keto-L-gulonsav; 2 KDG: 2-kcto-D-glükonsav. 7
